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上海復申生物科技有限公司

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[供應]kit-FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2025-04-22 21:00:07

有效期:2025年4月22日 -- 2025年10月22日

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FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover, 上海復申生物江浙滬*代理商,常年現貨供應更多現貨*產品訂購!

FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒 

zui適用于Realtime PCR用cDNA合成的預混型逆轉錄試劑。

ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆轉錄酶『ReverTra Ace』開發的Realtime PCR用的逆轉錄試劑盒,是包含逆轉錄反應用的所有組分的5×濃度的*預混型試劑,只需添加模板RNA和水即可迅速地開始反應。另外,由于采用了zui適用于Realtime PCR用短鏈目的片段cDNA合成的反應組成,可在短時間內高效率地制備適用于Realtime PCR的cDNA模板。
 

ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)中添附了具有強力DNA分解活性的gDNA Remover,通過在逆轉錄反應前處理模板RNA,可簡便地制備不含基因組DNA的cDNA。zui適用于檢測目的基因中存在假基因,或無法在橫跨內含子的位置上設計引物,模板RNA中有基因組DNA殘留問題等Realtime PCR實驗。

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 特征   FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover

 

特征1. *預混型試劑
本試劑是在−20℃條件下也不會凍結的*預混型試劑。只需添加模板RNA和水,即可簡便地合成重復性良好的cDNA。

特征2. 逆轉錄反應(−)對照溶液容易配制
由于添附有同樣預混型的no-RT Control,逆轉錄反應(−)對照溶液也很容易配制。

特征3. 實現了更廣的可定量擴增區域(dynamic rang)
由于采用了Oligo dT和Random Primer按*比例混合的primer mix,RNA的整個區域可進行均一、高效率的逆轉錄反應。因此,可對更廣的可定量擴增區域進行分析。

特征4. 與Realtime PCR試劑的高適應性
采用了對Realtime PCR的反應體系影響zui小的組分,即便向PCR反應液中帶入zui多20%液量的逆轉錄反應液,也能顯示出很好的線性。zui適用于低表達量mRNA的高靈敏度檢測。

特征5. 可簡便、迅速地去除基因組DNA<ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover>
按順序添加去除基因組DNA的試劑和逆轉錄反應試劑,只需20分鐘即可配制不含基因組DNA的cDNA。

 

 

 FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover

實驗例 

 

 實驗例1 與其他公司預混型cDNA合成試劑逆轉錄反應效率(cDNA合成量)的比較

以HeLa total RNA100ng為模板,按各公司試劑盒的推薦條件進行逆轉錄反應,再用Realtime PCR對5種目的基因進行定量。
結果可見,用本試劑盒可得到zui高合成量。

●cDNA合成
試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及其他公司同類型(預混型)產品
模板:HeLa total RNA 100ng /10μl反應體系
反應條件:各公司試劑盒推薦的條件

●Realtime PCR
試劑:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
目的片段:代表性基因5種
測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

 實驗例2 模板RNA量對合成效率的影響(標準曲線直線性的確認)

為評價模板RNA量對逆轉錄合成效率的影響,以HeLa total RNA 2pg?2μg(8個梯度)為模板進行逆轉錄反應,再用Realtime PCR對5種目的基因進行定量。結果可見,5種目的基因的標準曲線沒有交叉,顯示了很好的直線性。由此可見,用本試劑盒可對各種濃度范圍的RNA進行同等效率的逆轉錄。

●cDNA合成
試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)
模板:HeLa total RNA 2pg-2μg /20μl反應體系

●Realtime PCR
試劑:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
目的片段:代表性House Keeping Gene 5種
測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

 


 

 實驗例3 gDNA Remover去除基因組DNA效果的確認


為了確認gDNA Remover去除基因組DNA的效果,按以下條件進行了逆轉錄反應,再以β-Actin為目的片段進行Realtime PCR。
結果可見,gDNA Remover處理(+)、逆轉錄(−)<下面③>的條件下無法確認到擴增,說明基因組DNA已被去除。

●cDNA合成
試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)
模板:自制的HeLa total RNA 0.5μg /10μl反應體系
條件:用gDNA Remover添加(+)、或不添加(−)的4×DN Master Mix去除gDNA后,再分別用5×RT Master MixⅡ或5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control進行逆轉錄反應

●Realtime PCR
試劑:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
目的片段:ACTB(188bp)
測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

 

 實驗例4 與其他公司同類型產品去除基因組DNA效果的比較


向HeLa total RNA中添加過量的人基因組DNA,通過該實驗,與其他公司同類型產品比較去除基因組DNA的效果。
結果可見,ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover去除基因組DNA的效果。

●cDNA合成
試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)及其他公司同類型試劑盒2種
模板:HeLa total RNA(0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng,100ng, 1μg)+人gDNA 100ng/20μl反應體系
條件:各公司試劑盒的推薦條件
●Realtime PCR
試劑:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
目的片段:ACTB(188bp)
測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

 

 FSQ-301去基因組高效率反轉錄試劑盒 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover

 

簡要備注

 

Q1. 推薦反應時間為15分鐘,如果延長時間能否提高cDNA的合成量?
A1. tRNA等量很多的RNA全部進行逆轉錄反應時,延長反應時間可提高收量,但一般情況下推薦37℃15分鐘可得到足夠的cDNA。

Q2. 哪些RNA可作為模板RNA使用?  
 
A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。

Q.3 是否需要RNase H處理?  

 A3. 由于模板RNA的殘留會對PCR產生抑制作用,一般情況下,逆轉錄反應結束后需通過RNase H對模板RNA進行分解。但本試劑盒采用了本公司新開發的系統,模板RNA在逆轉錄反應后會被非酶性去除,因此逆轉錄反應后無需進行RNase H處理。

 

 

 FSQ-301 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover

參考文獻

 

1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226(2003)
2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66(2002)
3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246(2002)
4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460(2001)
5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675(2000)
6)S.Lee et al.,Gene,245:253−266(2000)

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