FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒  

產品介紹：

適用于合成Realtime PCR用cDNA的逆轉錄試劑盒。

本試劑盒是適用于Realtime PCR用cDNA制作的逆轉錄反應試劑盒。由于采用了本公司
高性能逆轉錄酶『ReverTra Ace』，反應效率非常出色。另外，通過改良，使得帶入到
Realtime PCR反應體系中的逆轉錄反應液的影響降到小，即使在PCR反應體系中添加
了多至20％體積的逆轉錄反應液，也能表現出良好的反應曲線，因此，適合用于表達量
較少的mRNA的高靈敏度測試。由于精簡了試劑盒的構成，可非常簡便地進行操作，僅需
約15分鐘的逆轉錄反應，即可得到充分的cDNA。

特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰當比例的mix primer（oligo dT和Random primer）、以及經改良的反應緩沖液，可實現高效率的逆轉錄反應。

特征2. 反應時間僅需15分鐘
逆轉錄反應僅需15分鐘即可完成。此外，即便是要除去對Realtime PCR反應有阻礙的殘留的模板RNA，也無須追加RNase H處理。
特征3. 提高了和Realtime PCR試劑的適應性
通過改良，使帶入到Realtime PCR反應體系的逆轉錄反應液的影響降到小。即使在PCR反應體系中添加了多至20% (V/V)的逆轉錄反應液，也能表現出良好的反應曲線。因此，適合用于表達量較少的mRNA的高靈敏度檢測。

FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒 

規格參數Specifications

實驗例1 與用其他公司產品cDNA合成量的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板，根據各公司試劑盒推薦的條件進行逆轉錄反應。然后，在Realtime PCR反應液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分別添加上述的逆轉錄反應液各1% (V/V)，用Realtime PCR對β-Actin和Polymerase ε的cDNA量進行定量。結果可見，在使用本試劑盒的情況下，兩個目的片段都有high的收量。 

 實驗例2 RNase H處理與否對檢測靈敏度影響的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍線）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成試劑盒，按各自推薦的實驗步驟進行逆轉錄反應(B公司試劑盒分別按RNase H處理（紅線）/未處理（橙線）兩種方法進行)。然后，按和實驗例1同樣的方法檢測β-Actin的擴增效果。結果顯示，用B公司的試劑盒RNase H未處理（橙線）的情況下，檢測效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍線）進行反應，即便不追加RNase H處理也能顯示出很高的擴增效率。已經過實驗證明，用本試劑盒的情況下，RNase H處理與否靈敏度相等。
※本試劑盒不包含RNase H處理步驟。

實驗例3 模板RNA量的添加量對合成效率影響的探討

在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反應體系(10μl)中，分別添加HeLa細胞由來的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分別進行逆轉錄反應。然后，采用和實驗例2同樣的方法擴增β-Actin基因。結果可見，在探討的范圍內，模板RNA的量和cDNA的收量密切相關，但無論模板RNA量的多寡，仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見，在目的片段濃度有差異的樣品之間，逆轉錄反應效率的變化并不大，因此可將定量結果的誤差控制在小范圍內。

簡要備注

Q1. 雖然反應時間僅需15分鐘，但如果延長反應時間，是否可提高cDNA的合成量？
A1. 要對tRNA等高表達量的RNA進行*逆轉錄時，延長反應時間可提高合成量，但一般情況下按照標準的推薦條件37℃15分鐘即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?  
 A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。
Q.3 需要進行RNase H處理嗎?  
 A3. 由于殘留的模板RNA會阻礙PCR反應，所以一般情況下逆轉錄反應結束后都要通過RNase H分解模板RNA。但本試劑盒運用本公司開發的新系統，在逆轉錄反應后可用非酶性方法除去模板RNA。因此，逆轉錄反應后無需RNase H處理。

 參考文獻

1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226（2003）
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）

價格表

*反應體系為10μl時的反應次數。

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