78833核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒Thermo

使用Thermo Scientific NEPER核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒可以在兩小時以內(nèi)分別抽提出胞漿和核蛋白組份。該方法是微量離心管方法，主要步驟包括首先用含有去垢劑的低滲緩沖液裂解細胞，然后微量離心以便沉淀完整的細胞核，此后去除胞漿組分，zui終裂解細胞核。一般使用該方法所得的細胞質(zhì)與細胞核組分之間的交叉污染<10%。一般從2x10⁶個細胞中能夠抽提出胞漿蛋白200-500μg，細胞核蛋白100-200μg（濃度>1mg/ml）?？梢酝ㄟ^改變抽提中所用的核抽提試劑（NER）的量而調(diào)整所需要的蛋白濃度而不會影響抽提效率。

從細胞中專一地抽提核蛋白是許多基因調(diào)節(jié)研究中成功的關(guān)鍵因素。然而目前大多數(shù)分離細胞核、制備核蛋白抽提物的方法需時很長并且需要機械勻漿、反復(fù)凍融、超速離心或者透析等步驟，而這些步驟很可能會影響到許多脆弱的核蛋白的完整性。NE-PER*試劑盒解決了這些問題，可以得到高質(zhì)量濃縮的核蛋白抽提物，所得的抽提物可用于EMSA及其它分析技術(shù)。

產(chǎn)品特點：

快速–在兩小時以內(nèi)獲得核組分和胞漿組分。

簡單–使用臺式微量離心機和微量離心管方法，因此不需要繁瑣的反復(fù)凍融、杜恩斯勻漿、長時間的離心以及低溫試驗。

通用–從同一個組織或細胞樣品中即可分別獲得其細胞核和細胞質(zhì)抽提物。

相容性強–抽提物可用于蛋白免疫印跡、凝膠阻滯分析、蛋白定量分析、報告基因分析以及酶活性分析等下游應(yīng)用。

利用Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒從多種哺乳動物細胞系中制備的胞漿組分和核組份的蛋白量。利用Thermo Scientific BCA微量蛋白定量分析試劑盒（產(chǎn)品貨號 23235）進行蛋白定量。顯示的數(shù)值為兩次單獨分離的平均值。

對HeLa細胞的胞漿及核組分進行蛋白免疫印跡分析，結(jié)果顯示交叉污染極少。利用4-20% 梯度Tris－甘氨酸變性凝膠對總蛋白量（20μg）相等的四種樣品進行電泳。將蛋白轉(zhuǎn)移到醋酸纖維素膜上，用含有3%BSA的Tris緩沖液進行封閉。A. 用抗Oct-1的抗血清（1:400）進行結(jié)合，然后利用1:100,000的標記辣根過氧化物酶的二抗進行結(jié)合。B. 用抗hsp90的抗血清（1:400）進行結(jié)合，然后利用1:50,000的標記辣根過氧化物酶的二抗進行結(jié)合。兩個分析所用的底物均為用于蛋白免疫印跡的SuperSignal皮克級化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品貨號 34080）。

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