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【詳細(xì)說明】

用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強(qiáng)陽離子交換色譜柱分離，高效液相色譜-紫外檢測(cè)器/二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

5 、儀器
5.1 液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器/二極管陣列檢測(cè)器。
5.2 分析天平：感量0.0001 g 和0.01 g。
5.3 pH 計(jì)：測(cè)量精度±0.02。
5.4 溶劑過濾器。

6 、測(cè)定步驟

6.1 試樣的制備
稱取混合均勻的15 g原料乳樣品（準(zhǔn)確至0.01 g），置于50 mL具塞刻度試管（4.11）中，加入30 mL乙腈（4.1），劇烈振蕩6 min，加水定容至滿刻度，充分混勻后靜置3 min，用一次性注射器（4.8）吸取上清液用針式過濾器（4.10）過濾后，作為高效液相色譜分析用試樣。
6.2 高效液相色譜測(cè)定
6.2.1 色譜條件
a） 色譜柱：強(qiáng)陽離子交換色譜柱，SCX，250 mm × 4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相當(dāng)者。
注： 宜在色譜柱前加保護(hù)柱（或預(yù)柱），以延長色譜柱使用壽命。
b） 流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖溶液（4.7）- 乙腈（70+30，體積比），混勻。
c） 流速：1.5 mL/min。
d） 柱溫：室溫。
e） 檢測(cè)波長：240 nm。
f） 進(jìn)樣量：20 μL。
6.2.2 液相色譜分析測(cè)定
6.2.2.1 儀器的準(zhǔn)備
開機(jī)，用流動(dòng)相平衡色譜柱，待基線穩(wěn)定后開始進(jìn)樣
6.2.2.2 定性分析
依據(jù)保留時(shí)間*性進(jìn)行定性識(shí)別的方法。根據(jù)三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間，確定樣品中三聚氰胺的色譜峰（參見附錄A）。必要時(shí)應(yīng)采用其他方法進(jìn)一步定性確證。
6.2.2.3 定量分析
校準(zhǔn)方法為外標(biāo)法。
6.2.2.3.1 校準(zhǔn)曲線制作
根據(jù)檢測(cè)需要，使用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.6.3）分別進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。
6.2.2.3.2 試樣測(cè)定
使用試樣（6.1）分別進(jìn)樣，獲得目標(biāo)峰面積。根據(jù)校準(zhǔn)曲線計(jì)算被測(cè)試樣中三聚氰胺的含量（mg/kg）。試樣中待測(cè)三聚氰胺的響應(yīng)值均應(yīng)在方法線性范圍內(nèi)。
注： 當(dāng)試樣中三聚氰胺的響應(yīng)值超出方法的線性范圍的上*，可減少稱樣量再進(jìn)行提取與測(cè)定。
6.2.3 結(jié)果計(jì)算