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實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real Time Quantitative PCR）

熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)介紹：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。
   實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

 定量（Absolute Quantification，AQ）分析用于確定未知樣本中某個(gè)核酸序列的量值，即通常所說(shuō)的拷貝數(shù)，應(yīng)用與病原體檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)，及基因表達(dá)研究。

非特異性熒光標(biāo)記：SYBR Green

SYBR Green特性：（1）.只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光。（2）.變性時(shí)，DNA雙鏈分開(kāi)，無(wú)熒光。（3）.在延伸結(jié)束階段采集熒光信號(hào)。（4）.SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光，所以必須在反應(yīng)結(jié)束時(shí)做熔解曲線(xiàn)分析。

特異性熒光標(biāo)記：

TaqMan探針的特性：（1）.5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等 （2）.3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）（3）.探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無(wú)熒光， R與Q分開(kāi)，發(fā)熒光（4）.Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針

定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品：

（1）.含有和待測(cè)樣品相同擴(kuò)增片段的克隆質(zhì)粒（2）.含有和待測(cè)樣品相同擴(kuò)增片段的cDNA（3）.PCR的產(chǎn)物，可分別做系列稀釋。

服務(wù)流程：

注意：客戶(hù)可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動(dòng)項(xiàng)目。

我司分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目包括：
       熒光定量PCR，反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測(cè)；PCR產(chǎn)物克隆，TA克隆，亞克隆；RNAi干擾檢測(cè)；miRNA檢測(cè)；質(zhì)粒載體構(gòu)建等