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青海發(fā)光桿菌中蛋白質(zhì)的提取與純化技術(shù)

閱讀:1126      發(fā)布時間:2018-5-29
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青海發(fā)光桿菌實驗試劑

采用T7• Tag Affinity Purification Kit

T7•Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液:4.29mM Na2HPO4,1.47 mM KH2PO4,2.7 mM KCl, 0.137mM NaCl,1%吐溫-20,pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸,pH2.2. 中和緩沖液:2M Tris,pH10.4。 PEG 20000。

實驗步驟

1.100ml 含重組表達質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,離心5000g×5min,棄上清,收獲菌體,用10ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。

2. 重懸液于冰上超聲處理,直至樣品不再粘稠,4℃離心 14000g×30min,取上清液,0.45μm膜抽濾后作為樣品液。

3. 將結(jié)合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起,平衡至室溫,裝入層析柱中。

4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。

5. 10ml B/W緩沖液過柱,洗去未結(jié)合蛋白。

6. 用5ml洗脫緩沖液過柱,每次1ml,洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集,混勻后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。

7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中,雙蒸水透析24hr,中間換液數(shù)次。

8. 用PEG 20000濃縮蛋白。

青海發(fā)光桿菌注意事項

蛋白在過層析柱前,要0.45μm膜抽濾,否則幾次純化后,柱子中會有不溶物。

奇異變形桿菌 CMCC49005

副溶血弧菌 ATCC33847

大腸埃希菌 ATCC8099

金黃色葡萄球菌 ATCC6538

肺炎克雷伯肺炎亞種 ACCC10498

黏質(zhì)沙雷菌黏質(zhì)亞種 ACCC10119

弗氏枸櫞酸桿菌 ACCC10490

鄉(xiāng)間布丘氏菌 ACCC10477

蜂房哈弗尼菌 CGMCC1.2026

普通變形桿菌 CGMCC1.1527

無丙二酸鹽檸檬酸桿菌 CGMCC1.2020

痢疾志賀氏 CGMCC1.1869
青海發(fā)光桿菌

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