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液相色譜儀有多種不同的分離機(jī)制
閱讀：1978 發(fā)布時(shí)間：2019-9-4
液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。具有、快速、靈敏等特點(diǎn)。廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。
按照分離機(jī)制不同，液相色譜可分為液-液色譜法、液-固色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法和空間排除色譜法等。
(1) 液-液色譜
又稱液-液分配色譜。在液-液色譜中，一個(gè)液相作為流動(dòng)相，另一個(gè)液相則分散在很細(xì)的惰性載體或硅膠上作為固定相。根據(jù)固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。
正相色譜法——流動(dòng)相極性小于固定相極性，即采用極性鍵合相，用非極性或極性小的溶劑（如烴類）并加入適量的極性溶劑（如氯仿、醇等）為流動(dòng)相，常用于分離中等極性化合物（如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機(jī)氯農(nóng)藥等）。
反相色譜法——流動(dòng)相極性大于固定相極性，即采用極性很小的鍵合固定相，用強(qiáng)極性溶劑為流動(dòng)相（如甲醇/水，乙*/水，水和無機(jī)鹽的緩沖溶液等），多用于分離多環(huán)芳烴等低極性化合物。
(2) 液-固色譜
固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進(jìn)行分離。常用的固定相是表面多孔和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁等，一般采用5~10μm的全多孔型微粒。其特別適用于非離子的、不溶于水的化合物以及幾何異構(gòu)體的分離。
(3) 離子交換色譜法
固定相為離子交換劑，常用基質(zhì)為合成樹脂及硅膠兩種，流動(dòng)相為鹽類的緩沖液。當(dāng)流動(dòng)相帶著組分電離生成的離子通過固定相時(shí)，組分離子與樹脂上可交換的離子基團(tuán)進(jìn)行可逆變換，根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應(yīng)用于無機(jī)離子的分離，而且廣泛地應(yīng)用于有機(jī)和生物物質(zhì)，如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
(4) 離子對色譜法
將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)分子電荷相反的離子（稱為對離子或反離子）加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成離子對，從而控制離子的保留值的色譜法。離子對色譜法也可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法，其中反相離子對色譜法應(yīng)用較多，它是以非極性烷基鍵合相為固定相，含低濃度反離子的水溶性緩沖溶液為流動(dòng)相，適用于極性較小的樣品分離。
(5) 空間排阻色譜法
空間排阻色譜法是按分子尺寸的差異進(jìn)行分離的一種液相色譜法，也稱凝膠色譜法。其固定相是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)，流動(dòng)相是可以溶解樣品的溶劑，它的選擇決定于固定相類型。空間排阻色譜可用于分離相對分子質(zhì)量大的分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）。
按照分離機(jī)制不同，液相色譜可分為液-液色譜法、液-固色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法和空間排除色譜法等。
(1) 液-液色譜
又稱液-液分配色譜。在液-液色譜中，一個(gè)液相作為流動(dòng)相，另一個(gè)液相則分散在很細(xì)的惰性載體或硅膠上作為固定相。根據(jù)固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。
正相色譜法——流動(dòng)相極性小于固定相極性，即采用極性鍵合相，用非極性或極性小的溶劑（如烴類）并加入適量的極性溶劑（如氯仿、醇等）為流動(dòng)相，常用于分離中等極性化合物（如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機(jī)氯農(nóng)藥等）。
反相色譜法——流動(dòng)相極性大于固定相極性，即采用極性很小的鍵合固定相，用強(qiáng)極性溶劑為流動(dòng)相（如甲醇/水，乙*/水，水和無機(jī)鹽的緩沖溶液等），多用于分離多環(huán)芳烴等低極性化合物。
(2) 液-固色譜
固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進(jìn)行分離。常用的固定相是表面多孔和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁等，一般采用5~10μm的全多孔型微粒。其特別適用于非離子的、不溶于水的化合物以及幾何異構(gòu)體的分離。
(3) 離子交換色譜法
固定相為離子交換劑，常用基質(zhì)為合成樹脂及硅膠兩種，流動(dòng)相為鹽類的緩沖液。當(dāng)流動(dòng)相帶著組分電離生成的離子通過固定相時(shí)，組分離子與樹脂上可交換的離子基團(tuán)進(jìn)行可逆變換，根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應(yīng)用于無機(jī)離子的分離，而且廣泛地應(yīng)用于有機(jī)和生物物質(zhì)，如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
(4) 離子對色譜法
將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)分子電荷相反的離子（稱為對離子或反離子）加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成離子對，從而控制離子的保留值的色譜法。離子對色譜法也可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法，其中反相離子對色譜法應(yīng)用較多，它是以非極性烷基鍵合相為固定相，含低濃度反離子的水溶性緩沖溶液為流動(dòng)相，適用于極性較小的樣品分離。
(5) 空間排阻色譜法
空間排阻色譜法是按分子尺寸的差異進(jìn)行分離的一種液相色譜法，也稱凝膠色譜法。其固定相是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)，流動(dòng)相是可以溶解樣品的溶劑，它的選擇決定于固定相類型。空間排阻色譜可用于分離相對分子質(zhì)量大的分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）。