Human AAHA ELISA Kit

特別說明： 
*: [96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整） 
#: 一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃. 
相關(guān)試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出！ 
Human AAHA ELISA Kit檢測原理: 
本試劑盒采用雙抗原夾心ELISA法。用抗原包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人AAHA
會與包被抗原結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗原和辣根過氧化物酶標記的親和
素。生物素化的抗原與結(jié)合在包被抗原上的人AAHA結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免
疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，
加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，AAHA濃度與OD450值之間呈正比，通
過繪制標準曲線計算出樣品中AAHA的濃度。 
Human AAHA ELISA Kit樣品收集: 
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃一夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集
血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。 
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可
檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。 
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會
影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組
織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，
取上清檢測。 
4. 細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。 
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測  
6. 樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。 
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍
存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復凍融。 
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋（建議先
做預實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。 
試驗所需自備物品: 
1. 酶標儀(450nm波長濾光片) 
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水 
4. 吸水紙 
檢測前準備工作: 
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超
過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。 
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，
靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為200ng/mL）。
然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃
度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL，標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔
0ng/mL。如配制100ng/mL標準品：取0.5mL200ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&
樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。  
4. 生物素化抗原工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配
制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗原稀釋液稀釋濃縮生物素化抗原(1:100)成工作
濃度。當日使用。 
5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制
100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。 
標準品稀釋方法圖例：（以500μL/管為例，也可根據(jù)實際用量來稀釋，如200μL/管）