KAPA hgDNA定量&QC試劑盒，是基于SYBR Green I染料法優化的高質量qPCR檢測試劑盒，包含KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix預先稀釋的一系列DNA標準品，以及針對于人類基因組單拷貝的高度保守區域的不同位點所設計的引物預混液。最小片段所對應的引物，用于獲得絕對定量的結果，而額外的引物，用于獲得在DNA樣本中可擴增模板量(質量高的核酸片段)的信息。這個試劑盒由此所產生的質量分數(即Q-ratios)，可以用于預測文庫的產量，或者對于如FFPE DNA這類樣本質量變化很大的樣本的工作流程進行調整。

產品名稱：KAPA hgDNA定量及QC試劑盒

產品貨號：KK4960

產品特點：

在單次檢測中，同時評估樣本量以及樣本質量

可以將質量分數(Q-ratios)與測序相關指標相關聯

高性能的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix

預先稀釋好的DNA標準品以及可以直接使用的引物

多功能、易于自動化的工作流程

產品原理：

一組DNA標準品，使用三對不同引物，用于產生(最多)三組標準曲線。這三對引物的擴增目標，位于某高度保守、單拷貝的人類基因組位點，其大小分別為41 bp, 129 bp以及305 bp。41 bp檢測用于DNA樣品的絕對定量。對于評估DNA質量，使用129 bp和/或305 bp引物預混液生成標準曲線并且檢測樣本。由于低質量的DNA樣本的長片段擴增效率會大幅度降低，相對的DNA質量可以通過41 bp檢測的濃度，對于129 bp或者305 bp檢測的濃度進行均一化，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量來進行推測。這種通過標準化產生的質量分數(值介于0和1之間)，可以用于指示DNA的質量，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量。

產品優勢：

指示樣品是否有足夠的量以及質量來成功構建文庫

未通過質控的樣本，不再進行后續文庫構建以及測序步驟，從而節約時間和精力

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使用預期：

Q129/41 比值和測序中的關鍵指標（如重復率）具有相關性

從250 ng Covaris打斷的FFPE DNA樣本(n=14)和對照組DNA(分別從培養細胞、新鮮冰凍樣本和血液中提取，n=6)，進行手動文庫構建。樣本按照Q129/41-比例升序在x軸上從左至右排列(FFPE樣本用黃色表示，對照組DNA用橙色表示)。文庫構建采用的是NEBNext® 試劑(New England Biolabs)，其中靶標捕獲前和靶標捕獲后的擴增環節(10個循環)采取KAPA HiFi 試劑盒。靶標捕獲使用的是定制的SeqCap EZ panel (300 genes,0.9 MB)。在Illumina HiSeq平臺上進行了測序(2 x 100 bp)。FFPE樣本的平均靶標覆蓋率(藍色點)是對照組的四倍(1,247X, vs. 301X)，平均重復率(紅色點)是對照組的兩倍(75% vs. 38%)。Q129/41 比值 > 0.4 的FFPE樣本所產出的文庫能夠達到測序質量要求。