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液相色譜柱的維護

閱讀:2156      發布時間:2016-9-27
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  液相色譜柱的維護:
  一、色譜柱的平衡
  反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。
  每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱,您就會在處理問題方面獲得zui大的"補償",而且您的色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟:
  a.平衡開始時將流速緩慢地提高,用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低,則需要較長的時間來平衡)
  b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽,應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
  二、色譜柱的再生
  長期使用的色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)??梢詫ιV柱進行再生,在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。
  建議用來沖洗柱子的溶劑體積
  色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積
  125-4mm 1.6ml 30ml
  250-4 mm 3.2ml 60ml
  250-10mm 20ml 400ml
  選擇再生方法:
  極性固定相(如Si,NH2* ,DIOL基色譜填料)的再生:正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
  非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8,CN等)的再生: 水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水
  注意:
  a. 在對NH2改性的色譜柱進行再生時,由于NH2可能以銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液*流出
  b. 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱,如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質,在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
  三、色譜柱的維護
  a.使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)
  b.大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍
  c.避免流動相組成及極性的劇烈變化
  d.流動相使用前必須經脫氣和過濾處理
  e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中
  f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。

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