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化學發光酶標儀的單雙波長測量方法你了解嗎?

閱讀:1990      發布時間:2018-9-11
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  化學發光酶標儀的單雙波長測量方法你了解嗎?
  在用酶聯免疫法測定抗原或抗體時,不論是定量試驗還是定性試驗都要求使用化學發光酶標儀進行測定。一般的化學發光酶標儀在測定中均有單波長和雙波長的模式,并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有時會不太重視單波長和雙波長的選擇,對使用單、雙波長給測定結果帶來的較大差異也不很了解,今天咱們就來了解一下這兩個測量方法。
  化學發光酶標儀與分光光度計、自動生化分析儀等的吸光度測定有所不同,一般分光光度計是水平光路,而化學發光酶標儀則是垂直光路,但測定原理相同,都是使用朗伯-比耳定律,測定的都是樣本的吸光度。垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
  化學發光酶標儀在用單波長測定吸光度時,除受到測定干擾(樣本的濁度、干擾色等)和電路干擾(包括噪音、漂移、電壓等)等因素外,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,由于液體表面張力的作用,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,從側面看似凹透鏡,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,光線在通過液體時,除正常被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光線通過凹透鏡那樣),影響吸光度的檢測。而化學發光酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源,如果每次能在同一部位檢測,吸光度的重復性將得到保證,但由于機械運動等造成的誤差,不可能保證每孔都在相同部位被檢測,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
  在雙波長測定中,減少了測定干擾和電路干擾,因此測定結果比單波長測量明顯好轉。
  由于液體表面張力的不同,導致單波長測定時的誤差較大。并且用不同的洗滌劑會影響到后加入底物和終止液后的液面情況,用加入表面活性劑的洗滌液清洗后,形成的液面更凹,對單波長檢測的影響更大,并且與表面活性劑的濃度成正比。而且中性蒸餾水洗滌后,單、雙波長檢測的結果基本一致。
  利用雙波長檢測,不會影響檢測靈敏度。建意在進行酶聯免疫檢測時,化學發光酶標儀比色應該優選雙波長。這樣可以提高臨界值處標本的分析正確度,減少實驗誤差。

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