細胞培養常規檢查

(一)一般形態觀察

生長狀態良好的細胞在普通顯微鏡下觀察時可見，細胞透明度大，輪廓不清，只有用相差顯微鏡觀察，才能看清細胞的細微結構。細胞內顆粒少、無空泡，胞膜清晰，培養上清液清澈透明，看不到懸浮細胞和碎片；細胞功能不良時，輪廓增強，胞質中常出現空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細胞之間空隙加大，細胞形態可變得不規則，甚至失去原有特點。只有生長狀態良好的細胞才能用于實驗。

細胞生長過程中，CO2積累增多，由于培養液內含有pH指示劑，因此其顏色變化可間接反映細胞的生長狀態。正常情況下，培養液呈桃紅色；呈橙黃色時，細胞一般生長狀態較好；呈淡黃色，則可能是培養時間過長、營養不足、細胞死亡過多；呈紫紅色，則可能是細胞生長狀態不好，或已死亡。

（二）細胞增殖生長狀態

初代或傳代培養時，都有一長短不同的潛伏期。傳代細胞系、胚胎組織或幼體組織潛伏期短，一般在第二天即可見細胞生長，一周內便可連接成片。成體組織的潛伏期長，老齡組織和癌組織更長，有時可達一周左右。

初代組織塊培養法細胞生長，zui先從組織“長”出的為游走細胞，它們多單獨活動，形態不規則，用縮時逐格顯微攝電影法可顯示出極活躍的變形、游走和吞噬活動。在游走細胞之后，接著長出的是成纖維細胞或上皮細胞。只有當出現細胞分裂、細胞數量逐漸增多、形成較大生長暈或連接成片時，細胞才真正進入增殖狀態。成纖維細胞是zui易生長細胞，生長速度較快，低倍鏡下觀察時，前哨部位細胞似火焰狀或放射形狀向外擴展；如接種為游走細胞、膠質細胞等細胞，在密度不大時，可連接成網狀，只有細胞密度增大時才連接成片。

上皮細胞排列緊密，相互接壤成膜狀；上皮膜邊緣整齊，細胞很少單獨活動，生長時整個上皮膜發生移動。上皮細胞尤其是外胚層來源的細胞如表皮細胞等，生長過程中常產生溶解酶，能使細胞間質發生液化，導致細胞相互分離，嚴重時可導致細胞脫落，其確切機制尚不明了．可能與產生透明質酸酶有關。

細胞接種后，經過懸浮期、潛伏期和指數增生期等后，zui終將長滿瓶壁，如不及時做再培養，由于營養物質消耗和代謝產物積累，細胞即進入停滯期。此時細胞輪廓增強，細胞內常出現前述有膨脹線粒體形成的堆積物，細胞變得粗糙，嚴重時細胞從瓶壁脫落，只有及時做傳代，才能使細胞繼續生長。

(三)微生物污染

在長時間反復培養過程中，即使細胞培養用品消毒操作嚴密，也會偶爾發生細菌、支原體、真菌、病毒和其他雜質細胞污染，需隨時注意，一旦發生污染，應及時進行處理。

(四)培養液

在正常情況下，培養液pH介于7．2～7．4，呈紅色。用一般培養箱培養時，隨細胞生長時間延長，CO2積累增多，在超過緩沖范圍之后，營養液酸化逐漸變黃色，這時如不
及時調節pH，會對細胞產生不利影響，嚴重時可使細胞退變死亡。培養液中加N-(2-羥乙基)N’-2-乙烷磺酸（N-2 Hydroxyethylpiperazme-N’-2-ethanesulionicacid，HEPES)或用5％CO2溫箱培養可使pH維持穩定。用含磷酸鹽緩沖系統培養液時，可因瓶口漏氣，CO2溢出，也可能由于培養瓶塞洗刷不潔，殘留堿性物質所致，使之變為堿性而呈紅色。更換營養液的時間，可依據營養物質的消耗而定，細胞生長旺盛時，2～3d更換一次；生長緩慢時，3～4d更換為宜。需特別注意，各種細胞對pH的要求不同。