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原代細胞 凍存及復蘇

時間:2017-9-4閱讀:443
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為了保存原代細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,zui終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。
復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養基。如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示)接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
一般原代細胞培養進入培養后有一段潛伏期(數小時到數十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。
IL11RA     Others    Canine    狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL1RL1     Others    Mouse    小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ANTXR2     Others    Mouse    小鼠 ANTXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
AMICA1     Others    Mouse    小鼠 AMICA1 / JAML 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD276     Others    Mouse    小鼠 B7-H3 / CD276 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Spike     Others    SARS    SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
HA     Others    H2N2    甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
原代細胞

 

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