腫瘤細胞轉染目前已經成為研究和控制真核細胞基因表達的重要手段。本文整理了一些關于轉染實驗前的準備工作及一些實驗過程中的小貼士，希望這些信息能夠幫助各位科研君們做好轉染實驗及提高實驗效率。

① 從健康細胞開始
Ⅰ 轉染實驗前，細胞解凍后傳代3–4次。 這使得細胞從解凍過程中恢復過來，并恢復正常的生長速度。
Ⅱ 僅使用活性 >90%的細胞——使用臺盼藍染色可輕松測定細胞活性。
Ⅲ 定期傳代細胞，切勿讓細胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。如果讓細胞長到匯合狀態(tài)，可能會改變細胞的生長速度以及形態(tài)。
a. 請在匯合率達到90%之前對細胞進行傳代。我們建議您使用胰酶替代物Cellstripper™試劑(Corning 25-056-CI)使細胞脫壁。Cellstripper™試劑可于室溫下存儲在通風櫥中?？赏ㄟ^添加過量的Cellstripper™來跳過PBS洗滌的步驟，然后吸棄全部液體，僅留可覆蓋瓶子表面的液體。
* 非酶類細胞分離溶液，其配方是螯合劑的配方，可溫和分離組織培養(yǎng)物的貼壁細胞。性質比胰酶更溫和。
b. 傳代條件取決于所用的細胞系。 部分經驗法則：
對于快速生長的細胞，倍增時間為16小時(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。
對于生長緩慢的細胞，倍增時間為36小時(如原代細胞)，按1：5的比例分瓶。
Ⅳ 保留凍存的細胞系，并定期解凍新細胞。 傳代次數高(>30–40)時，細胞的生長速度和形態(tài)會改變。

② 進行實驗之前，請先規(guī)劃您的實驗。
務必要熟悉實驗方案、確定所需的材料量，并在開始實驗前確認所需的一切物品條件均已齊備。
Ⅰ 開始前，設計好鋪板路線圖，標注好每次處理或實驗條件。
Ⅱ 計算所需脂質體和DNA的儲備量，并確認有足夠的下列材料：TransfectGRO減血清培養(yǎng)基(Corning 40-300-CVR)，Lipofectamine® 2000 或Lipofectamine® LTX試劑，以及DNA (0.5–1 µg/µL)。

③ 轉染時，請使用DNA。
Ⅰ 使用無內毒素的試劑盒和實驗方案制備DNA。
Ⅱ 通過測量OD 260/280值來確定DNA純度，測得的OD值應介于1.7–1.9]之間。數值過高或過低均說明有雜質，腫瘤細胞不宜用于轉染實驗。
Ⅲ 在無DNA/RNA酶的水或TE中稀釋DNA。
Ⅳ 制備的工作濃度為0.5–1 µg/µL。 可用SpeedVac®濃縮儀或透析過濾裝置(例如，Millipore Amicon®超濾管)來濃縮DNA。
200mg    氨馬尿酸標準品    61-78-9    Aminohippuric Acid    氨馬尿酸標準品
200mg    氨魯米特標準品    125-84-8    Aminoglutethimide    氨魯米特標準品
200mg    氨甲環(huán)酸標準品    1197-18-8     Tranexamic Acid     氨甲環(huán)酸標準品
200mg    氨基己酸標準品    60-32-2    Aminocaproic Acid    氨基己酸標準品
200mg    氨芐青霉素三水酸標準品    7177-48-2    Ampicillin Trihydrate    氨芐青霉素三水酸標準品
200mg    氨芐青霉素標準品    69-53-4    Ampicillin    氨芐青霉素標準品
200mg    氨苯甲酸鈉標準品    555-06-6    Aminobenzoate Sodium    氨苯甲酸鈉標準品
200mg    氨苯甲酸鉀標準品    138-84-1    Aminobenzoate Potassium    氨苯甲酸鉀標準品
腫瘤細胞