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當前位置：上海研生實業有限公司>>公司動態>>詳解原代細胞凍存的步驟
（1）選擇處于對數生長期的原代細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。
（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養的細胞類型來選擇，像有些科研君們就用corning胎牛血清,也有人用sigma的小牛血清）
（3）將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細胞種類及代次、凍存支數）。
（4）將裝好原代細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。
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原代細胞
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