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分享活腫瘤細胞表面受體配體結合檢測的新技術

時間:2017-11-1閱讀:413
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Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術相結合,用來進行活腫瘤細胞表面受體分析的一種技術。

    SNAP和CLIP是小的融合標簽蛋白,可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價結合, 其底物分別為芐甲基鳥嘌呤(BG)和芐甲基胞嘧啶(BC)。由于底物可與各種染料形成衍生物,這樣,通過共價反應,染料就標記到SANP或CLIP上了。

    SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質的N端或C端,所以我們可以構建SNAP或CLIP與目標蛋白的表達載體。質粒轉染、融合蛋白表達后,加入標記了熒光染料的底物,我們可以得到標記了熒光染料的目標蛋白。

    在Tag-lite技術中,用pSNAP或pCLIP與編碼目標GPCR的基因構建質粒,轉染入細胞后,就可表達N端融合了SNAP或CLIP的目標GPCR。

    底物(BG或BC)與HTRF熒光染料反應形成衍生物,例如與供體(Donor)鋱穴狀化合物(Lumi4®-Tb)形成衍生物,SANP-GPCR或CLIP-GPCR融合蛋白與其反應,則Tb被標記到GPCR上。加入受體(Acceptor)熒光染料標記的配體,腫瘤細胞可以進行受體配體結合實驗。根據實驗目的,HTRF的能量受體(Acceptor)與底物形成衍生物,則Acceptor被標記到GPCR上,可以進行GPCR同源二聚化實驗。除此之外,我們還可以進行GPCR異源二聚化實驗、寡聚化實驗以及內源化實驗等細胞表面受體分析。
鹽酸氟奮乃靜標準品    146-56-5     125mg    Fluphenazine Hydrochloride 
鹽酸氟奮乃靜庚酸酯標準品    3105-68-8     125mg    
鹽酸氟西泮標準品    1172-18-5     200mg    Flurazepam Hydrochloride CIV
鹽酸氟西汀標準品    56296-78-7     200mg    Fluoxetine Hydrochloride 
鹽酸格拉司瓊標準品    107007-99-8     150mg    Granisetron Hydrochloride 
鹽酸胍法辛標準品    29110-48-3     125mg    Guanfacine Hydrochloride 
鹽酸海克卡因標準品    532-76-3     1g    Hexylcaine Hydrochloride
鹽酸環苯扎林標準品    6202-23-9    200mg    Cyclobenzaprine Hydrochloride
鹽酸環丙沙星標準品    86393-32-0    400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride
鹽酸環噴托酯標準品    5870-29-1    300mg    Cyclopentolate Hydrochloride
鹽酸黃連素標準品    633-65-8    50mg    Berberine Chloride
鹽酸黃酮哌酯標準品    3717-88-2     200mg    Flavoxate Hydrochloride
腫瘤細胞

 

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