歐洲藥典近二十年來，已先后出了好幾版，在2007年版即提到支原體的NAT法（即核酸擴增技術，如PCR，熒光定量PCR等）可替代藥典傳統方法。
歐洲藥典強調了對核酸檢測方法的驗證，包括檢測限、特異性和耐用性（robustness）。
在檢測限方面，歐洲藥典指出，核酸擴增法如替代藥典規定的培養法，其檢測限需達到10CFU/ml，如替代指示細胞培養法（即DNA染色法），檢測限需達到100CFU/ml。也可通過核酸拷貝數確定檢測限，但應提前建立CFU與核酸拷貝數之間的換算關系。
在特異性方面，歐洲藥典規定了NAT法應能檢測污染細胞的常見的9種支原體，包括：
萊氏無膽甾原體（A. laidlawii）
發酵支原體（M.fermentans）
豬鼻支原體（M. hyorhinis）
口腔支原體（M. oral）
精氨酸支原體（M. arginini）
肺炎支原體（M. pneumonia）
雞毒支原體（M. gallisepticum）
滑液支原體（M. synoviae）
螺原體（Spiroplasma citri）
并且，NAT法應檢查與細菌、哺乳動物DNA是否有交叉反應。
在耐用性方面，歐洲藥典強調檢測結果的穩定性，不受微小波動的影響，因此一般需經多輪測試。每次測試也需要做復孔。
那么，進行方法驗證還需要什么呢？標準品？對了。標準品好比一把尺子，能確定你所用的支原體PCR或qPCR檢測試劑盒到底是否符合要求。當然，標準品自身也需要標定，這個也是可以檢測的。德國MB公司即提供有標定過的10CFU/管和100CFU/管的支原體菌株，其中10CFUTM支原體靈敏度套裝囊括了以上提到的9種常見支原體，而且這些支原體都是凍干粉型滅活的，不會給實驗室帶來支原體污染，這一點也令人很放心。
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