支原體早發現于1898年，1956年Robinson等*從細胞培養物中分離出支原體，之后國內外關于支原體污染細胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中，有100余種。
現在只要是做細胞培養并發表論文，期刊就要求一定要做支原體檢測。一般要一周測一次支原體。
支原體檢測有好幾種方法。藥典規定有培養法和DNA染色法。
現在，PCR和qPCR方法也較為常用。PCR法支原體檢測原理是針對支原體16s rRNA保守序列設計引物，只要有支原體DNA擴增片段即證明有支原體污染存在。
qPCR支原體檢測則除了引物外，還會用到探針，均熒光素標記，從而觀察在FAM通道是否有代表支原體的擴增曲線出現。
qPCR屬于比較高級的方法，PCR或者其他方法屬于比較普通的方法，更多用于常規科研實驗室，PCR也可用于工業。如用于工業，則PCR和qPCR均需要完成方法學驗證方案，證明符合歐洲等藥典。
支原體檢測還有其他幾種方法：
如生物化學發光法：它是通過支原體酶與特異底物反應產生ATP， ATP濃度與其激發的熒光強度成線性關系。通過檢測熒光強度，從而斷定是否有支原體存在。
如細胞感應法，即通過支原體激活HEK-Blue™-2細胞上的TLR2受體，誘發分泌堿性磷酸酶，可通過專有培養基變色檢測到支原體的存在。
每種方法都有自己的長處和短處，可從結果是否直觀，操作時間長短，靈敏度，檢測的支原
體種類多少，以及是檢支原體DNA還是活的支原體等方面來評價。
但對于工業放行檢測而言，迄今為止，只有具有高靈敏度的PCR法或qPCR法才用于工業，如Minerva Biolabs生產的支原體檢測試劑盒。而其他方法都是僅能用于科研。
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