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新手→大神都想知道的細胞傳代指南

閱讀:753      發布時間:2022-6-27
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細胞培養的本質是細胞克隆技術。原理就是盡可能給細胞提供類似于體內的環境,在無菌條件下,給予適當的溫度和酸堿度以及細胞生長繁殖所必要的營養條件,使其能在體外維持正常的生長繁殖,并保持其結構和功能的技術。

細胞培養技術的應用十分廣泛,基礎醫學研究,抗體制備,新藥篩選,基因工程等等都需要用到細胞培養技術。

但在日常的細胞實驗中,實驗者經常會遇到一些問題,今天我們就這些常見的問題給出相應的建議,希望對小伙伴們有所幫助。

 

貼壁細胞如何高效傳代?

 

貼壁生長的細胞,在培養瓶或者培養皿長至單層鋪滿的狀態后后,空間已基本上飽和,細胞生長、增殖受阻,為使其繼續擴增或生長,需要進行傳代(再培養)處理。同時,傳代培養也可用于細胞種的保存。不僅如此,各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎的。

懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞則需經消化等處理后才能分瓶。

一般使用胰蛋白酶,將貼壁細胞消化成成單個細胞,也可加入EDTA提高消化能力(EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+)。

常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實驗時,先用吸去細胞培養上清,用PBS清洗細胞,棄掉洗滌液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據培養皿的大小不同,一般2-5ml消化液即可,以剛好鋪滿整個皿底為原則),觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要3-5分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養基中止消化。

800-1000rpm,離心5分鐘,然后棄去中止用的培養基,加入適合的新的培養基輕輕混勻細胞,移入到新的培養瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養。

細胞傳代的頻率為多久?

貼壁型的細胞的匯合度約為*的時候,需進行傳代操作。

當細胞以克隆的形式生長時,匯合度則達不到100%。對于該類型的細胞,達到或者接近最大密度的時候,即觀察不到細胞明顯擴增時,就需要進行傳代。

接觸抑制型細胞需要在細胞長滿之前傳代,避免產生細胞長滿后接觸抑制后產生性狀的改變。

懸浮型的細胞必須在細胞達到最大飽和密度之前傳代,懸浮細胞傳代時只需稀釋至合適的密度,讓細胞有充足的營養恢復到對數生長期。

如何處理腫瘤細胞株?

了解每株細胞可能產生的生物危害是很難的。

  • 強烈推薦,所有的人類和其他靈長類生物的細胞在預防HIV和肝炎病毒的實驗條件下操作;

  • 所有的操作必須在生物安全柜中操作,遵守生物安全柜使用規范;

  • 操作過程中產生的廢液和廢儀器都要經過清洗、酸處理等處理后才能丟棄。

 

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