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Western blot底物發(fā)光檢測(cè)試劑可由標(biāo)記于二抗上的辣根過氧化酶催化，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，可以靈敏地檢測(cè)出目的蛋白的存在。ECL底物化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒基于新一代增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物研制而成，并對(duì)成份做了優(yōu)化。產(chǎn)品背景低，穩(wěn)定性好。它由辣根過氧化物酶(HRP)催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出熒光，可對(duì)X光膠片曝光，也可直接進(jìn)行l(wèi)uminometer檢測(cè)或者熒光CCD掃描。

1. 按常規(guī)Western blot操作，二抗孵育后，進(jìn)行后一次洗滌時(shí)，根據(jù)膜的大小，按每10 cm2 膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B混勻，配制成發(fā)光檢測(cè)工作液。
2. 用平頭鑷子將膜取出，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，以去除膜上多余的液體。膜的蛋白面朝上，置于潔凈保鮮膜（某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜）上。用吸管將配制的發(fā)光檢測(cè)液轉(zhuǎn)移到蛋白膜上，使其均勻覆蓋，室溫孵育2分鐘。
3. 用平頭鑷夾持蛋白膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，以去除膜上多余的液體。膜的蛋白面朝上，包裹于潔凈保鮮膜內(nèi)。輕輕趕出其間的氣泡，固定在X片暗盒內(nèi)。
4. 在暗室中取一張X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分鐘。立即顯影定影，根據(jù)其曝光強(qiáng)度，縮短或延長(zhǎng)下一張X片的曝光時(shí)間（對(duì)微弱信號(hào)，曝光時(shí)間可延長(zhǎng)至數(shù)小時(shí)）。

1.ECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相互污染后會(huì)導(dǎo)致 A液或B液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。
2.各溶液使用后，請(qǐng)蓋緊瓶蓋，以防失效。特別是B液，含有氧化劑，比較容易 被還原而失效。
3.ECL的熒光持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)，但開始反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)熒光更強(qiáng)一些，隨后熒光會(huì)逐漸減弱，因此請(qǐng)注意充分利用這熒光較強(qiáng)的30分鐘進(jìn)行壓片。
4.ECL A液和B液均對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。