亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

1、人正常組織來源細胞實驗材料 
培養液（PRMI 1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。 
2、培養液配制 
培養液 85-95% 
小牛血清 5-15% 
雙抗（選擇） 100u/ml 
3、人正常組織來源細胞操作過程 
（1）培養細胞：選擇處于指數生長期、用大瓶培養的80-90%匯合單層培養細胞； 
（2）終止培養：當有大量圓形發亮細胞出現時，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養混合液，置溫箱繼續培養6-10小時以抑制分裂期細胞停止于分裂中期；（3）聚集細胞： 
（A） 搖動法： 
可利用分裂中期細胞變圓與底物附著不牢特點，此時可持培養瓶，左右反復橫向水平搖動，可使90%的中期分裂細胞從瓶壁脫落； 
（B） 消化法： 
將培養液倒入離心管內，給培養瓶內加0.025%胰蛋白酶液0.5-1ml/瓶，水平左右搖動，便培養瓶底壁面*接觸消化酶，稍后用彎頭吸管吹打，待細胞*脫落后，加入3-5ml前培養終止消化。用吸管移入裝有培養液的離心管內2000rpm10分鐘。棄上清液，留沉淀細胞； 
（4）低滲處理：給沉淀細胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均勻，在溫箱中靜置20-30分鐘； 
（5）預固定：向低滲處理適當的離心管中加新鮮配制的3∶2甲醇，冰乙醇固定液1-2ml，用吸管輕松吹打調勻，此措施能起到使細胞表面輕微固定，可防止固定后細胞粘連成塊。 
（6）固定：800-1000rpm10分鐘，棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml，加入時要沿管壁慢慢加入，后輕輕吹打，封口后室溫靜置30分鐘以上，反復三次； 
（7）制片：末次離心后，倒掉上清液，留沉淀細胞，人正常組織來源細胞加新鮮配制固定液0.5ml左右，混勻后冰片制片，其它同外周血方法。