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轉化細胞或組織化學染色的相關問題
閱讀：206 發布時間：2018-5-8附上我們這里轉化細胞的組化步鄹：（切片復溫涼干完畢）
1。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MPBS 20ml＋30%過氧化氫 1ml）30min，以消除內源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；
2。加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100 1ml＋0.01MPBS 100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MPBS清洗5min×3；
3。加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋疊氮納0.08g＋30% Triton X100 1ml）稀釋的*抗體4℃反應24-48h。吸去抗體，0.01MPBS洗5min×3；
4。加入血清稀釋液或0.01MPBS稀釋的二抗，室溫孵育2h。吸去二抗，0.01MPBS洗5min×3；
5。加入ABC復合物，室溫孵育2h，0.01MPBS洗5min×3，蒸餾水迅速沖三次；
6。加入硫酸鎳銨溶液（DAB 25mg＋蒸餾水50ml＋硫酸鎳銨醋酸緩沖液50ml＋葡萄糖200mg＋氯化銨40mg＋葡萄糖氧化酶1mg），進行免疫細胞化學顯色，時間不超過30min。不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MPBS終止反應；
或直接加入配好的DAB溶液進行顯色。
7。梯度酒精（70％、80％、90％酒精5min×1，95％酒精5min×2，100％酒精5min×3）脫水之后，二甲苯透明，中性樹脂封片。
而對培養的細胞則比較簡單：（細胞種在玻片上）
1。固定液固定10－30min，0.01MPBS清洗2min×3；
2。羊血清封閉液封閉（可以加入0.3% Triton X100 ）30－60min分鐘；
3。加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋疊氮納0.08g＋30% Triton X100 1ml）稀釋的*抗體室溫反應1－2h或4℃過夜。吸去抗體，0.01MPBS洗2min×3；
4。加入血清稀釋液或0.01MPBS稀釋的二抗，室溫孵育1h。吸去二抗，0.01MPBS洗2min×3；（如果是熒光二抗就可以直接用50％甘油封片，進行觀察了）
5。加入ABC復合物，室溫孵育1h，0.01MPBS洗2min×3，蒸餾水迅速沖三次；
6。加入硫酸鎳銨溶液（DAB 25mg＋蒸餾水50ml＋硫酸鎳銨醋酸緩沖液50ml＋葡萄糖200mg＋氯化銨40mg＋葡萄糖氧化酶1mg），進行轉化細胞化學顯色，時間不超過30min。不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MPBS終止反應；
或直接加入配好的DAB溶液進行顯色。
100715-200501 檢查 50mg N-甲基-3-氮苯雙環（3，3，1）壬-9α醇
100716-200501 含量測定 50mg 鹽酸苯環壬酯
100717-201002 含量測定 100mg 非洛地平
100718-200701 UV含量測定 100mg 二氟尼柳
100719-200701 含量測定 100mg 羥苯甲酯鈉
100719-200701 含量測定 100mg 布洛芬雜質C
100720-200701 檢查用 20mg 2-（4-異丁酰苯基丙酸）布洛芬雜質A）
100721-200701 檢查用 20mg 4-異丁基苯甲酸
100721-200701 檢查用 20mg 布洛芬雜質B
轉化細胞