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技術文章

胎兒彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素

閱讀:238          發布時間:2022-3-31

胎兒彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒反應五要素:


參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

活化轉錄因子4抗體

腺苷酸激酶-1抗體

纖維狀肌動蛋白抗體

聚集蛋白抗體

調亡誘導因子抗體

調亡誘導因子抗體

間變型淋巴瘤激酶抗體

膜粘連蛋白A1抗體

自噬相關蛋白1抗體

β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 

銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體

水通道蛋白-7抗體

谷丙氨酸氨基轉移酶1抗體

p21活化蛋白激酶ARHG7抗體

磷酸化肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體

2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體

血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體

腺苷A2b受體/神經生長因子1受體抗體

去整合素樣金屬蛋白酶19抗體

原癌基因AF4蛋白抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣3蛋白抗體

去整合素樣金屬蛋白酶20抗體


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