亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

細胞生長的空間密度是細胞培養的關鍵。具體養細胞時應該摸索細胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細胞瓶里的細胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細胞濃度低于1~5×10^5個/mL而導致“孤獨死”（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）。因而細胞接種前，要先通過細胞計數來調整細胞濃度。
當培養的貼壁細胞形態不好時，可在傳代時，先倒掉舊的培養基，加入3ml新的培養基（有無血清都可以）洗滌一次，用滴管吸走，再加入3ml培養基，沿著瓶底輕輕吹打一遍，然后吸走。這時在正式進行消化、吹打。
其次，把吹打下的細胞懸液加入到含有新培養基的培養瓶內，置于培養箱里培養，按時間點觀察細胞貼壁情況（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培養基，加入3ml新培養基再輕輕洗一次，然后加入*培養基培養并觀察細胞生長情況以及形態。直至找到細胞的形態為止。
至于在培養瓶中加入多少培養基量，則是需要實驗汪們自己去摸索的。對于生長快的細胞，易生長的細胞加少一點培養基，細胞形態會更好，但是要注意對換液時間的把握。
如何選擇培養瓶。一般，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞，用玻璃瓶培養的效果會更好。因此，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復蘇時或者原代培養），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。
細胞凍存時，蓋子要擰緊，不然復蘇水浴時會滲水，造成細胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號的管子會有差別），蓋子擰緊后用封口膜封住。且每支凍存管都要標上細胞的名稱、凍存時間，并記錄在冊，以免后續復蘇細胞時，取錯細胞。
細胞凍存時要嚴格進行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火兩重天的生活環境只會讓嬌弱的細胞自爆身亡，謹記：緩降溫！但如果真心趕時間時，可以使用細胞凍存盒進行細胞凍存，而后盡快將其轉入液氮中。此外，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細胞全部浸在液面下。
細胞解凍時，由于凍存管管壁較厚、隔熱，而導致水浴時間太長（2min還沒融化）時，可以將水浴鍋的溫度調至40℃左右，可以縮短解凍時間。
提前預定超凈臺，減少復蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細胞房人滿為患，超凈臺使用緊張，復蘇1h后，還沒有加入新的培養液。（高濃度DMSO防止胞內形成冰晶，凍存時保護細胞，但復蘇融解后，浸泡時間太久會對細胞有毒性）
復蘇細胞時一定要有耐心，因為有些細胞在復蘇一星期后才會真正有起色。因而，盡管細胞在復蘇三四天后沒有任何動靜，也不要輕易倒掉所有細胞，要耐心等待，兩周后再做決定。