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轉化細胞的大規模培養三種方式
閱讀：160 發布時間：2017-9-29轉化細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展;利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的大規模培養技術具有越來越重要的市場意義。哺乳細胞的大規模培養方式有三種：貼壁培養、微載體培養、無血清懸浮培養。這三種方式均可用于293細胞的大規模培養。
細胞特性
細胞是用5型腺病毒75株系轉化，含有Ad5 E1區的人胚腎細胞。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉染技術構建而成。293細胞是貼壁依賴型成上皮樣細胞，表現出典型的腺病毒轉化細胞的表型，細胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。293細胞為人亞三倍體細胞系。293細胞在無Ca2+或含Ca2+培養基中可同樣生長，也可生長在血清濃度降低的培養基中。
轉瓶培養
轉瓶培養一般用于小量培養到大規模培養的過渡階段，或作為生物反應器接種細胞準備的一條途徑。與傳統靜止單層培養相比，轉瓶具有三大優點：為細胞提供較大的生長表面;輕微的轉動可以防止培養液中形成的某些成分對細胞生長可能產生的影響;細胞大部分時間僅覆蓋一薄層培養液，有利于氣體交換。我們已成功實現293細胞的轉瓶培養。由于293細胞對生長環境的改變較為敏感，細胞容易成團，因此維持穩定的溫度、酸堿度和轉動速度對細胞正常均勻生長至關重要。
現在使用的轉瓶培養系統包括二氧化碳培養箱和轉瓶機兩部分。293細胞接種后，維持適當的轉速培養。不同的細胞轉速略有不同。細胞的均勻分散貼壁情況與培養液溫度、瓶子的轉動速度和細胞特性有關。在5-6天的培養周期中，細胞量可增殖20倍。
反應器貼壁培養
此種培養方式中，轉化細胞貼附于固定的表面生長，不因為攪拌而跟隨培養液一起流動，因此比較容易更換培養液，不需要特殊的分離細胞和培養液的設備，可以采用灌流培養獲得高細胞密度，能有效地獲得一種產品;但擴大規模較難，不能直接監控細胞的生長情況，故多用于制備用量較小、價值高的生物藥品。
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轉化細胞