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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
GSK2194069 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1～3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
GSK2194069是有效和特異的β-酮酰還原酶（KR）抑制劑，在檢測釋放CoA實驗中的IC50分別為7.7±4.1nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1332331-08-4 純度：98.0% 分子量：428.48 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
紅色鹽幾何形菌Lysinibacillus sphaericus魚孕激/孕
構巢曲霉Lysinibacillus sphaericus鮭魚降鈣(SCT)
玫瑰單胞菌Bacillus thuringiensis鮭魚降鈣(SCT)
釀酒酵母Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)
蘑菇屬Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)
舌狀炭角菌Bacillus thuringiensis魚雌二
澳型核果褐腐病菌Bacillus thuringiensis魚雌二
根霉Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質激
蒼白色鏈霉菌Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質激
空腸彎曲桿菌Bacillus thuringiensis魚雌激
蘇云金芽胞桿菌柏氏變種Bacillus thuringiensis魚雌激
香菇*Bacillus thuringiensis魚促卵泡
棒束青霉Bacillus thuringiensis魚促卵泡
湖北擬酵母Bacillus thuringiensis魚促黃體激
秀珍菇Bacillus thuringiensis魚促黃體激
枯草芽孢桿菌Bacillus thuringiensis魚磷化腺苷活化蛋白激
磷化細胞核因子/k基因結合核因子p100抗體瓜硫桿狀菌
磷化1型神經纖維瘤抗體瓜枝孢（黃瓜黑星病菌）痢疾志賀菌
磷化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）紅城紅球菌
磷化谷受體2B抗體第九矛束霉擬威克酵母
β-酮酰還原酶(KR)抑制劑(GSK2194069)SPTLC2 英文名稱： 絲酸棕櫚酰轉移酶2抗體 0.2ml
Phospho-EGFR(Tyr845) 英文名稱： 磷酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml
轉移生長因子–α抗體 Anti-TGF-α 0.1ml
Anti-TLR4/FITC 熒光素標記Toll樣受體4抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴細胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體 規格 0.1ml
BCHE(butyrylcholinesterase)CT 丁酰膽堿脂酶抗原(C端)Multi-class antibodies規格： 0.5mg
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