二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)抑制劑（Gimeracil）公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-NPPC/FITC 熒光素標(biāo)記促尿鈉排泄肽前體C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

金黃殼囊孢菌Shewanella piezotolerans

紅色蠟?zāi)?/span>Haloarcula japonica

大腸埃希菌Haloferax lucentense

大腸埃希氏桿菌Natrinema pallidum

硝孢鏈霉菌Haloarcula quadrata

牛輪狀病Natrialba aegyptia

英戈爾德氏擬本森頓酵母Natrinema pellirubrum

炭疽芽孢桿菌Halogeometricum borinquense

球孢枝孢Flavobacterium hydatis

秀珍菇Sphingomonas sp.

黑曲霉Acinetobacter calcoaceticus

傳染性法氏囊病病Sphingomonas sp.

橢圓釀酒酵母Pseudomonas fluorescens

鳳尾菇2號Halomonas sp.

pPSUMOYersinia sp.

考克氏菌Pseudomonas fragi

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：供鑒別用

平菇Pleurotus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：溶出度檢查

多粘芽孢桿菌Bacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查
二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)抑制劑（Gimeracil）ZFX 英文名稱： 鋅指蛋白X染色體蛋白抗體 0.2ml

DUSP1 英文名稱： 原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體 0.1ml

活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體 Anti-ATF4 0.1ml

Anti-CD64/PE 熒光素PE標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體IMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-eIF2 alpha (Ser51) 磷酸化真核啟動因子2α抗體 規(guī)格 0.1ml

Elastin 彈性蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg