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Tunel

冰凍切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟1、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。2、 修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。4、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用），加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫孵育2小時(shí)，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。5、 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧化氫溶液（過氧化氫：甲醇=1:9）室溫避光孵育15 min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。6、 加試劑3：切片稍甩干后，每張切片加適量試劑3(converter-POD）覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。7、 DAB顯色：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為細(xì)胞核呈棕黃色，自來水沖洗切片終止顯色。8、 復(fù)染細(xì)胞核：Harris蘇木素復(fù)染3min左右，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。9、 脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無(wú)水乙醇Ⅰ6min -無(wú)水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。石蠟切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟1、 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。(冬天適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間）2、 修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。4、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用），加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫孵育2小時(shí)，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。5、 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧化氫溶液（過氧化氫：甲醇=1:9）室溫避光孵育15 min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。6、 加試劑3：切片稍甩干后，每張切片加適量試劑3(converter-POD）覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。7、 DAB顯色：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為細(xì)胞核呈棕黃色，自來水沖洗切片終止顯色。8、 復(fù)染細(xì)胞核：Harris蘇木素復(fù)染3min左右，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。9、 脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無(wú)水乙醇Ⅰ6min -無(wú)水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。Tunel

茁彩生物（zcibio）專注于各種生物制劑、標(biāo)準(zhǔn)品、API及化合物庫(kù)，總部位于中國(guó)上海，分別在國(guó)內(nèi)各個(gè)省份設(shè)置代理商。Zcibio經(jīng)過不斷努力已經(jīng)研究出更多產(chǎn)品，包括旗下的流式抗體，分子生物學(xué)試劑，以及WB輔助試劑， 產(chǎn)品涵蓋癌癥、神經(jīng)科學(xué)、抗感染、表觀遺傳學(xué)等20個(gè)熱門研究領(lǐng)域。同時(shí)zcibio還擴(kuò)大了市場(chǎng)的外包服務(wù)，其中包括常用的HE然后，病例切片，免疫組化以及TUNEL檢測(cè)，項(xiàng)目超過20種不同類型的試驗(yàn)，可滿足實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)的項(xiàng)目要求。zcibio 對(duì)每批產(chǎn)品都進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，力求用科學(xué)的方法做科學(xué)產(chǎn)品！！