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RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）介紹
此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。
細胞特性
1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
2） 含量：>1x106 個/mL
3） 形態：不規則圓形，傳代時密度要大，易分化
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的*培養基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
小鼠白血病病毒誘發腫瘤巨噬細胞RAW 264.7*培養液配方（100 ml）：
DMEM (Invitrogen, 11960-044) 88 ml
Glutamax（invitrogen 35050-061） 1 ml
Sodium Pyruvate （invitrogen 11360-070） 1 ml
FBS (Gibco) 10 ml
采購DMEM基礎培養基時要確認下培養基中谷氨酰胺、丙酮酸鈉是否添加，如果沒有添加，在培養細胞時技術人員要添加谷氨酰胺、丙酮酸鈉。
氣相：空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養。
參考傳代周期：3-5天
參考傳代比例：1：3-1：6
參考換液頻率：2-3天
凍存液：90%血清，5~10%DMSO，現用現配。
RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）培養時注意事項
(1) 該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，吸走部分培養液，留下少許培養液（如T75培養瓶留下10ml），用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，吹打后接種到新的裝有新鮮培養液的培養瓶內。
(2) 該株巨噬細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形的細胞。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆在一起，有些細胞甚至脫落漂浮，這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來離心，細胞沉淀可以繼續培養。
(3) 血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 用細胞刮鏟將細胞從培養瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內。
3. 在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時，用細胞刮鏟將細胞從培養瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內。可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用配好的凍存液重懸細胞， 注意DMSO終濃度為5~10%。按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少4個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：
一、原代細胞服務：
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等
原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務
二、細胞系服務：
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書
細胞系培養過程的技術指導
細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等
三、iPS細胞服務：
iPS細胞基礎培養（有滋養層or無滋養層）
iPS細胞增殖及冷凍保存
iPS基礎培養技術實習
新藥及實驗儀器上市前評估
四、其他技術外包服務、客戶定制服務等
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