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高效微流電動液相色譜系統(tǒng)與電噴霧電離質(zhì)譜聯(lián)用分析肽和蛋白質(zhì)
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上海通微分析技術(shù)有限公司
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毛細(xì)管電色譜(CEC)結(jié)合了毛細(xì)管電泳(CE)分離效率高和毛細(xì)管液相色譜(cHPLC)選擇性多和樣本容量大的特點(diǎn)。然而，通過商用CE儀器，在沒有壓力的情況下運(yùn)行CEC系統(tǒng)時(shí)，會出現(xiàn)與氣泡形成和柱干燥等有關(guān)問題和困難。這些問題可以通過高效微流電動液相色譜系統(tǒng)(eHPLC)解決，其中流動相由壓力流和電滲透流(EOF)共同驅(qū)動。在此系統(tǒng)中，壓力作用于毛細(xì)管柱以抑制氣泡的形成。eHPLC可以通過旋轉(zhuǎn)式注射器實(shí)現(xiàn)定量進(jìn)樣。EOF可以與壓力流方向相同，也可以與壓力流方向相反。因此，可以控制樣品的洗脫順序。更重要的是，通過改變洗脫液的組成，可以使用類似于高效液相色譜法的溶劑梯度模式。基于eHPLC系統(tǒng)，CEC的優(yōu)勢就可以得到充分利用。
質(zhì)譜(MS)為各種樣品提供了高靈敏度和可靠的檢測，特別是在樣品數(shù)量非常有限的生物化學(xué)應(yīng)用分析中。此外，MS還提供了有關(guān)分析物結(jié)構(gòu)和特征的重要信息。因此，eHPLC-MS在生物樣品分析中起著重要的作用。然而，eHPLC和MS之間的接口可能會影響儀器的性能。在所有已開發(fā)的接口中，電噴霧電離(ESI)的接口允許在低質(zhì)量掃描范圍內(nèi)對質(zhì)量高達(dá)幾十萬的大生物分子進(jìn)行質(zhì)譜分析，并且其適合與HPLC、CE、CEC、eHPLC等聯(lián)用。
我們使用相同的實(shí)驗(yàn)裝置進(jìn)行了cHPLC-ESI-MS和eHPLC-ESI-MS，從實(shí)驗(yàn)和理論兩方面研究了eHPLC中電解質(zhì)濃度和pH對ESI-MS信號強(qiáng)度的影響，還研究了施加電壓和有機(jī)改性劑對肽分離的影響。通過對胰蛋白酶分解形成的肽段、蛋白質(zhì)和修飾蛋白的分析，證明了eHPLC-ESI-MS系統(tǒng)的功能。