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內切酶EcoRI, 無動物源性使用方法

時間:2023/9/4閱讀:263
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內切酶EcoRI, 無動物源性背景:

經過基因工程改造的EcoRIADCF,能夠在5~15分鐘內消化DNA。它可用于鑒定質粒DNAPCR產物和基因組。EcoRIADCF具有以下特點:在515分鐘內快速消化,極-好的酶活性冗余,易于處理底物過量或具有挑戰性的模板消化。這種酶不含動物來源的成分

 

艾美捷內切酶EcoRI, 無動物源性

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

 

內切酶EcoRI, 無動物源性組成:


 

單位定義

一個單位定義為在37°C50µL推薦反應緩沖液中1小時內消化1µgλDNA所需的EcoRI

 

熱滅活

80°C下培養20分鐘。

質量控制

凈化

SDS-PAGE檢測結果大于95%

核酸內切酶殘基

20UEcoRI與超螺旋質粒DNA37°C下孵育4小時,DNA電泳中未檢測到質粒的變化。

/白篩選試驗

1μl EcoRI消化含有locZa基因的合適載體。將消化產物連接并轉化到大腸桿菌感受態細胞中。在含有X-GalIPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養板上,成功門控的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產生藍色菌落,而中斷的基因(即降解的DNA末端)產生白色菌落。ADCF限制性內切酶必須產生少于1%的白色菌落。

DNA酶殘基

20UEcoRI與雙鏈DNA37°C下孵育16hDNA電泳未檢測到DNA的變化。

RNase殘基

20UEcoRIRNA37℃下孵育1小時,電泳中未檢測到RNA降解

結扎和清算

在最佳反應溫度下用20UEcoRI消化后,DNA片段可以在22°C下與T4 DNA連接酶(Fast)連接。在這些連接的片段中,通過瓊脂糖凝膠電泳測定,大多數片段可以用EcoRl重新切割。

 

宿主DNA殘基

通過對大腸桿菌16S rDNA特異性的TaqMan-qPCR檢測酶溶液中的核酸殘基,檢測到少于10pg的大腸桿菌基因組殘基。

 

宿主蛋白殘留:

通過ELISA測定大腸桿菌宿主蛋白低于50ppm

 

無菌

未檢測到大腸桿菌。

內毒素殘留量

<10 EU/mg


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