磷酸二酯酶 (PDE) 在 cAMP 和 cGMP 信號傳導的動態(tài)調節(jié)中發(fā)揮著重要作用。PDE4D 具有 3',5'-環(huán)狀 AMP 磷酸二酯酶活性并降解 cAMP。PDE4D 抑制劑對 PDE4D 活性的抑制導致細胞內 cAMP 水平升高。PDE4D 基因編碼至少 9 種不同的亞型，并與中風、哮喘、心律失常和心肌病有關，使其成為重要的治療靶點。

基于 PDE4D 細胞的活性測定旨在篩選培養(yǎng)細胞中的 PDE4D7 抑制劑。該測定基于用 CRE 熒光素酶報告基因轉染細胞。CRE 報告基因包含受 cAMP 反應元件 (CRE) 控制的螢火蟲熒光素酶基因。細胞內 cAMP 升高會激活 CRE 結合蛋白 (CREB) 與 CRE 結合并誘導熒光素酶的表達。在細胞生理學研究中，毛喉素通常用于提高細胞內 cAMP 水平。當瞬時轉染CRE報告基因的細胞被毛喉素激活時，細胞內cAMP水平上調，從而誘導CRE熒光素酶報告基因的表達。然而，當細胞用 PDE4D7 表達載體和 CRE 報告基因共轉染時，毛喉素誘導的 cAMP 水平降低，導致熒光素酶表達水平降低。當細胞用 PDE4D 抑制劑處理以抑制 PDE4D7 活性時，cAMP 水平恢復，從而導致更高的熒光素酶活性。

艾美捷PDE4D基于細胞的報告基因檢測試劑盒：

貨號：60505

英文名稱：PDE4D Cell-Based Reporter Assay Kit

規(guī)格：500 rxns.

同義詞：PDE4D、磷酸二酯酶 4D、PDE4D 細胞活性測定試劑盒、細胞測定試劑盒、細胞測定、報告基因測定試劑盒

提供方式：該試劑盒包括 CRE 熒光素酶報告基因（與組成型表達的海腎（海三色堇）熒光素酶載體預混合，作為轉染效率的內部對照）和 PDE4D7 表達載體

需要但未提供的材料：

• 哺乳動物細胞系和適當的細胞培養(yǎng)基

• 96 孔組織培養(yǎng)處理的白色透明底測定板（Corning # 3610）

• 哺乳動物細胞系轉染試劑

• Opti-MEM I 低血清培養(yǎng)基 (Invitrogen #31985-062)

• Forskolin (Sigma Aldrich #F3917)

• 兩步熒光素酶（Firefly 和 Renilla）檢測系統(tǒng)：

兩步熒光素酶(Firefly & Renilla) 檢測系統(tǒng) (BPS Bioscience, #60683)：該系統(tǒng)直接在生長培養(yǎng)基中檢測細胞。它可以與任何光度計一起使用。不需要自動注射器。

• 光度計

PDE4D基于細胞的報告基因檢測試劑盒數據：

PDE4D基于細胞的報告基因檢測試劑盒文獻參考：

1. Montminy MR et al. (1987). Nature  328(6126):175-178

2. Fan Chung, K. (2006). Eur. J. Pharmacol.  533(1-3):110-117

3. Malik, R. et al. (2008). Appl. Microbiol. Biotechnol. 77(5): 1167-1173