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 實驗方法原理

將人滑膜從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置α-MEM生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。

實驗材料滑膜組織

試劑、試劑盒Ⅰ型膠原酶胎牛血清生理鹽水PBS

儀器、耗材超凈臺解剖剪過濾網(wǎng)離心管記數(shù)板培養(yǎng)瓶

實驗步驟

一、實驗材料準備

1.   滑膜組織：將外科手術(shù)切下的組織在手術(shù)臺上請護士將標本放入低溫生理鹽水中，在手術(shù)完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。

2.   試劑：4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制)，培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM)。

3.   器械：手術(shù)器械。

二、方法

1.   將切下的組織在手術(shù)臺上請護士將標本放入低溫生理鹽水中(靜止)，在手術(shù)完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。

2.  在超凈臺中將標本放入培養(yǎng)皿中，加入α-MEM洗滌。

3.  獲得組織切開，仔細辨認于關(guān)節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織，附于關(guān)節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化)，仔細剔除脂肪組織，用α-MEM洗二次(以去除紅細胞)，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎。

4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數(shù)次)。

5.   30分鐘后收集管細胞：細胞懸液經(jīng)70 um細胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000轉(zhuǎn)離心6分鐘，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網(wǎng)的組織，繼續(xù)用于消化。

6.   離心管底細胞用α-MEM離心洗滌2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉(zhuǎn)，離心6分鐘，后一次用記數(shù)板觀察到有細胞。細胞終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

7.  60鐘后收集第二管細胞：細胞懸液經(jīng)70 um細胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000 rpm離心6分鐘；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘，后一次用記數(shù)板觀察細胞并計數(shù)。細胞終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

8.   必要時可做第三管細胞收集；并立即作原代滑膜細胞培養(yǎng)。

9.  每2-3天換液一次。

收起 

注意事項

1.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM，加10%胎牛血清。不能用小牛血清，胎牛血清用國產(chǎn)即可；

2.  必須用Ca2+-free的PBS。

其他

實驗材料準備

1.   滑膜組織：將外科手術(shù)切下的組織在手術(shù)臺上請護士將標本放入低溫生理鹽水中，在手術(shù)完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。

2.   試劑：4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制)，培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM)。

3.   器械：手術(shù)器械。