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關于ELISA實驗測定成果過錯的原因總結
閱讀:217 發(fā)布時間:2019-7-23
關于ELISA實驗測定成果過錯的原因總結
本公司將始終堅持信譽立業(yè),以人為本,質量,誠信服務的宗旨,不斷拼搏,開拓進取,與各界朋友攜手共創(chuàng)美好未來.接下來介紹ELISA實驗測定成果過錯說明。
操作說明;
1. 內源性物質
普遍認為大約40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質,能夠不同程度影響檢測成果。常見的攪擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠(s)抗體、穿插反響物質和其它物質等。
(1)類風濕因子
人血清中型類風濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合,然后導致假陽性。處理該狀況的方法是:①用F(ab)2代替完好的②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)的固相吸附劑處理(將熱變性參加到標本稀釋液中同樣有用);③檢測抗原時,能夠用等參加到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體
ELISA體系中固相一抗和符號二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被露出出來,使C1q 能夠將二者連接起來,然后構成假陽性。處理的方法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)(s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來,也能構成假陽性。處理的方法是:可在標本稀釋液中參加過量的動物s) ,但參加量缺乏或亞類不一起無效。
(4)嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結合構成復合物,在ELISA方法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn),處理的方法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
(5)醫(yī)源性誘導的抗鼠(s) 抗體
臨床展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治,用放射性同位素符號鼠源性抗體的影像確診及靶向醫(yī)治等新技術,均有可能使這些患者體內發(fā)生抗鼠抗體;別的,被鼠等嚙齒類動物咬傷的患者體內也能夠發(fā)生抗鼠(s) 抗體。這些患者ELISA測守時均可發(fā)生假陽性。處理的方法是:測定抗原時,在標本中參加足量的正常鼠 (s) ,然后戰(zhàn)勝因為上述原因構成的假陽性。
(6)穿插反響物質
類類AFP樣物質等,是與靶抗原有穿插反響的物質。在用多抗測定抗原時對測定成果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會呈現(xiàn)假陽性成果。
(7)標本中其它成分的影響 血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定成果有攪擾效果。
2. 外源性物質
外源性物質常常是因為用于ELISA測定的血標本的收集、儲存不妥等原因所構成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝聚不全和采血管中添加物等影響。
(1)標本溶血
因為各種人為原因引起的標本溶血,均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中,會導致非特異性顯色,攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果,標本收集時有必要留意防止溶血。
(2)標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
(3)標本保存不妥
在冰箱中保存過久的標本,血清中可聚合成多聚體、AFP可構成二聚體,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、乃至構成假陽性;標本放置時刻過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性削弱,亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定,5天內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質部分濃縮,散布不均,應充沛混合后再測定,但混勻時應輕柔,不行激烈振動。
(4)標本凝聚不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液收集后1/2~2h開端凝結,18~24h*凝結。臨床查驗工作中,有時為了爭取時刻快速檢測,常在血液還未開端凝結時即強行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構成假陽性成果;這類狀況于次日復查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復查成果變?yōu)殛幮浴榉乐股鲜鰯嚁_效果,處理的方法i好是血液標本收集后有必要使其充沛凝結后再別離血清,或標本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加恰當?shù)拇倌齽?/span>
(5)標本管中添加物質的影響
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有必定攪擾效果。
經(jīng)過以上的剖析和總結,臨床查驗ELISA測定中呈現(xiàn)假陽性或假陰性等過錯的成果,掃除ELISA試劑盒要素和操作要素,再有就是從標本要素進行剖析,并應采納相應措施掃除攪擾,然后保證檢測成果的準確性