化工儀器網
技術文章
細胞爬片免疫熒光實驗技術具體步驟
閱讀：371 發布時間：2025-2-14 細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導，細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒光標記技術相結合，原理就是利用抗原-抗體反應之后，采用熒光標記，標記完成后，顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少，從而做出一個定位研究，也可以為細胞內信號傳導提供一個明確的指導，細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速度快的特點，是目前比較常用的組織學技術，也是比較精確的。 在進行細胞免疫熒光過程中，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養基內，細胞在爬片上生長，進而進行細胞的免疫熒光。
細胞爬片免疫熒光實驗技術具體步驟:
第一天：
1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；
2. 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室溫通透 20 min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；
4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min，吸水紙吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉 30 min；
5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃ 孵育過夜；
第二天：
6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中 20-37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。
7. 復染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，對標本進行染核，PBST 5 minx4 次洗去多余的 DAPI；8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
注意事項 :
1. 取細胞爬片時，動作應輕柔，防止將細胞爬片夾碎，影響實驗進程。
2. 種細胞過程中，要注意將細胞輕柔混勻，「八」字或者「十」字形搖晃，防止細胞局部生長過密。