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-20℃保存

1、長期存放請分裝后-20℃保存。
2、避免反復凍融。
3、凍存后溶解時注意重新混勻。

一年

1. PBS、培養液
2. 顯微鏡
3. 離心機

1) 盡量減少反復凍融的次數，以免失效。
2) 在使用細胞消化液的過程中，要特別注意避免消化液被細菌污染。
3) 細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1. 貼壁細胞的消化：
（1） 吸除培養液，用無菌PBS、培養液洗滌細胞1次；
（2） 加入少量無酶細胞消化液，略蓋過細胞即可。（一般按細胞的有效體積的10倍添加）
（3） 室溫放置10min （如置于37℃脫壁反應會加速），直至細胞脫壁。（不同細胞消化時間有差異）。亦可用顯微鏡觀察，如果細胞明顯收縮并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化；或者用槍頭吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除消化液。
（4） 加入細胞培養液或5倍體積的PBS緩沖液終止反應。如果發現消化不足，則再加入無酶細胞消化液重新消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細胞，棄上清，盡量吸除無酶細胞消化液，加入含血清的培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。

2. 組織的消化：
（1） 用無菌PBS、培養液洗滌組織1次，用無菌的刮勺或茶匙將剪碎的組織碎片轉移至合適容器。
（2） 按組織有效體積的5-10倍，加入無酶細胞消化液。
（3） 置于37℃作用4-48小時，無需振蕩，不同的細胞消化時間有所不同。對于較難分解的腫瘤細胞，可作用5天或更長時間，但應重新用消化液懸浮。
（4） 吹打組織碎片數次，釋放松散的細胞，輕輕晃動培養瓶或皿，倒置顯微鏡下檢查分離情況。當細胞量少和/或在組織碎片中仍可見細胞時，需要繼續消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細胞，棄上清，盡量吸除無酶細胞消化液，加入含血清的培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。