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掌握D-螢光素鉀鹽使用方法,輕松提升實驗效果!

2024-3-21  閱讀(447)

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一. 體外生物發光檢測

1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液 (100-200×) ,混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。

2)用預熱好的組織培養基將儲存液稀釋至0.15-0.3mg/mL的工作液濃度。

3)去除細胞培養基。

4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育5-10 min,然后進行圖像分析。

二. 體內活體成像分析

1)用無菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。

2)用0.2 µm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。

3)腹腔注射(i.p.),按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;

4)注射入體內10-15 min(待光信號達到強穩定平臺期)后進行成像分析。

注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

三,逐典D-螢光素鉀鹽優勢

1.高純度(HPLC驗證純度≥99%)

2.優異的生物發光性能

3.高溶解度(>40mg/ml)

四,應用場景

D-熒光素鉀鹽在不同領域具有多種應用場景。其中包括蛋白表達研究、抗腫瘤或抗病物研究以及mRNA疫苗開發等。

蛋白表達研究:將Luc基因插入需要研究的蛋白中,可用于定量目標蛋白在實驗動物體內的表達情況。

抗腫瘤或抗病物:在腫瘤細胞或病毒中導入Luc基因,建立腫瘤或病毒感染小鼠模型,注射藥物后,通過活體成像技術觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。

mRNA疫苗開發:在mRNA中插入Luc基因,脂質體包裹后注射實驗動物后,可通過活體成像技術可觀測疫苗的免疫效果。

五,應用案例分享





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