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EVOQ™液質聯用 三重四級桿質譜儀-馬血漿中克侖特羅檢測的應用
閱讀：1487 發布時間：2019-4-15本文討論了EVOQ LC-TQ在反復進樣馬血漿樣品條件下可 維持的高靈敏度。含有克侖特羅的馬血漿樣品，去除蛋白 后，未通過分流閥直接注射到系統中（稀釋并進樣）。對四 條標準曲線進行了分析：開始時一條，每隔100個樣品做一 條。結果顯示，使用EVOQ LC-TQ測試，在連續兩天時間分 布在400個馬血漿樣品中的四條標準曲線，響應因子的相 對標準偏差（%RSD）成功達到<10%的評判標準，響應因 子的%RSD<5%。
可維持的高靈敏度和高穩定性是實驗室定量分析成功與否 的決定性因素。本實驗目的是測試布魯克EVOQ LC-TQ的離子源 設計，對馬血漿樣品采取稀釋后直接進樣的方式，沒有通 過在線的分流閥。每一個樣品進樣，離子源都暴露在從柱 子上洗脫出的所有基質中。因為在電噴霧過程中，流動相在 加熱的氮氣輔助下霧化蒸發，鹽、脂質、糖、蛋白質和其他 污染物容易凝聚在離子源內，隨著時間的推移導致靈敏度 降低。如果仔細研究離子源內氣體流體動力學，設計應避 免凝聚區域和冷卻點，并消除氣體渦流。采用夾帶排空系 統 (主動排空) 可以顯著提高離子源的穩定性，同時保持高 靈敏度。通過簡單的有機溶劑沉淀除去蛋白后的馬血漿樣 品被用做基質，用于稀釋后進樣實驗。
實驗條件
Sample Preparation 馬血漿樣品用冷的含酸乙腈沉淀（3:1，v/v），樣品離心 10 min，取上清液按體積比1:1用流動相A稀釋。 色譜 (Advance™ HPLC)
• 色譜柱: C18, 3 μ, 100x2.1 mm (ACE®, 編號：111-1002)
• 進樣體積: 30 μL • 流速: 0.45 mL/min
• 流動相 A: 0.2% 甲酸水溶液
• 流動相 B: 0.2% 甲酸乙腈溶液
• 梯度: • 0.0min 10% B • 0.3min 10% B
• 2.5min 95% B • 2.8min 10% B • 4.5min 10% B 質譜 (EVOQ Elite™)
• VIP-HESI 真空隔層加熱電噴霧離子源的加熱溫度: 300 °C
• 加熱氣體流量：68 unit • 霧化氣流量：90 unit
• 錐孔氣溫度：300 °C • 錐孔氣流量：10 unit
• 噴霧電壓：+3500 V • 克倫特羅和克倫特羅D9標記物
• m/z 277.1>168 (CE:25v) • m/z 286.1>204 (CE:12v)
結果和討論
響應因子是在整個校正范圍內，校與內標物的峰面積 比（校正/ IS）除以濃度。這是嚴格的靈敏度檢測方法，因為 它考慮到校正曲線上的每一個點。靈敏度的任何下降都將 表現為響應因子較高的%RSD。離子源同時需要穩定性和 持續高靈敏度，從實用角度講，這一數據的重要性超過一系 列高濃度進樣的重復性，而后者在供應商的市場營銷文獻 中經常出現。 四條校正曲線的響應因子的%RSD小于5%，很好的滿足生 物分析方法的驗證標準。圖1顯示了和第四校正曲線的 擬合情況，兩者差異微不足道，并在整個校正范圍內表現出 高靈敏度。
主動排空系統：
主動排空系統在離子源內創造微弱的壓 力差，從而引導并消除霧化氣和污染物的 渦流。廣口排氣通道確保迅速清空霧化 氣體，保持前面離子取樣錐孔的潔凈。霧 化氣體被夾帶在排氣系統的氣流中，從 LC-MS系統中清除。
表1和2表明，在反復進樣血漿樣品后，離子源可維持的高靈 敏度性能，這是一個常規生化實驗室惡劣環境下的關鍵需 求。圖3顯示了所有四條校正曲線中，校正水平樣品的 色譜圖。
結論 ：本實驗結果表明，EVOQ LC-TQ連續運行超過48小時（周 末），并成功地分析了五個96孔板的樣品，其靈敏度損失微 不足道。主動排空設計使得EVOQ LC-TQ離子源盡管反復 暴露于基質中，仍能保持高的靈敏度水平，確保在條件苛 刻的定量分析實驗室仍能保持穩定的狀態。