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SRM 2372a-人類DNA定量標準

SRM 2372a - Human DNA Quantitation Standard

        目的：本標準參考物質（SRM）用于人類基因組脫氧核糖核酸（DNA）定量材料的值分配，主要用于定量聚合酶鏈反應（qPCR）。
       描述：SRM 2372a的一個單元由三種在pH 8.0水性緩沖液中良好表征的人類基因組DNA材料組成。 這些成分來自人血沉棕黃層樣品，并標記為A，B和C。成分A由來自單個雄性供體的基因組DNA組成。 組分B由來自單個雌性供體的基因組DNA組成。 組分C由基因組DNA的重量混合物（1個雄性供體和3個雌性供體）組成。 一個SRM單元由一個無菌的0.5 mL每種成分的小瓶組成，每個小瓶包含約55 µL DNA溶液。 這些小瓶均貼有標簽，并用帶有顏色標記的螺帽密封。

認證值：表1中提供了認證值。這些認證值是基于8個染色體上的10個wei一靶標的液滴數字聚合酶鏈反應（ddPCR）分析計數，稀釋因子和液滴體積測量值而確定的。 NIST認證值是NIST對所有已知或疑似偏差來源均已考慮在內的值具有置信度的值。

表1. SRM 2372a（a）的數量和質量濃度的認證值副本號的值可通過計量學溯源到自然單位計數1和比率1以及單位制（SI）得出的體積單位。 DNA質量濃度值可從計量學上追溯到自然單位計數和比率1以及SI衍生的質量和體積單位。

（A）該值表示為x±U95％（x），其中x是認證值，U95％（x）是認證值的擴展不確定度。相信分析物的真實值在x±U95％（x）的區間內，置信度為95％。為了傳播這種不確定性，請將認證值視為具有均值x和標準偏差U95％（x）/ 2的正態分布隨機變量。

（B）拷貝數濃度值（每納升人類單倍體基因組當量（HHGE））基于八個染色體上十個目標wei一的液滴數（ddPCR）分析，稀釋因子和液滴體積測量值。

（C）由濃度結果計算的每微升人類基因組DNA ng的質量濃度值，是指HHGE中核苷酸堿基對（bp）的數量和鈉鹽的平均分子量構成DNA聚合物的核苷酸單體。

表2。檢測特異性mtDNA/nDNA比值（a）這些值在計量學上可追溯到ddPCR測量方法和所使用的分析。

（a）值表示為x±U95％（x），其中x是估計值，U95％（x）是其擴展的不確定性。該比率的真實值被認為在x±U95％（x）的區間內，置信度為95％。要傳播此不確定性，請將值視為具有均值x和標準偏差U95％（x）/ 2的正態分布隨機變量。

儲存和處理：在需要使用之前，應將SRM 2372a避光保存在2°C至8°C之間。
在取出樣品等分試樣進行分析之前，應短暫混合組分小瓶并離心（不打開小瓶蓋）。為使認證值適用，應在打開樣品瓶后立即取出材料并立即進行處理。認證值不適用于加蓋的小瓶中的任何材料。該認證僅適用于初次使用，如果以后再使用其余材料，則不能保證獲得相同的結果。

使用：對于qPCR測定，相對于認證質量濃度，為二級標準DNA溶液分配值。使用一個或多個由SRM 2372a組分制備的稀釋系列，將測定校準至SRM 2372a。對于非性別特異性qPCR分析，應將所有三個組件用作校正劑，以闡明潛在的材料分析特異性相互作用。用戶應記住，存在潛在的移液錯誤。因此，在準備校準溶液時應格外小心。

安全性：制備該產品時使用的每個供體單位均已通過FDA許可的測試，對人類免疫缺陷病毒（HIV-1 RNA和抗HIV 1/2），乙型肝炎（HBV DNA和HBsAg）呈陰性，丙型肝炎（HCV RNA和抗HCV），西尼羅河病毒（WNV RNA）和梅毒。此外，每個供體均根據FDA克氏錐蟲（Chagas）的指南進行了測試，發現為陰性/無反應性。但是，沒有已知的測試方法可以*保證這種材料中沒有傳染原。因此，應以生物安全等級1處理這種基于人類血液的產品。SRM 2372a組件和衍生的溶液應按照當地，州和聯邦法規進行處置。

資料來源：該SRM是在NIST對人體進行適當研究確定后開發的。