EPI400 感受態細胞

EPI400 Chemically Competent Cell



EPI400 感受態細胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400 感受態細胞簡要說明：
EPI400 來源于 EC100 菌株，將 EC100 核基因中控制質粒拷貝數的 pcnB 基因刪除后引入一個誘導啟動子 驅動的 pcnB 基因,即是 EPI100 菌株。EPI400 菌株可以降低質粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定 DNA 或毒性基因的克隆，在加入誘導劑- CopyCutter Induction Solution 后又可以提高質粒產量到正常狀 態。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA 。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標記的存在 使 EPI400 可用于藍白斑篩選，tonA 賦予其抗噬菌體 T1 和 T5 的能力，rpsL 賦予其鏈霉素抗性。EPI400 感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率可達 5×107 cfu/μg DNA。

EPI400 感受態細胞操作說明：
1. EPI400 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接 產物）并用手 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養基 (2YT 或 LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 60 分 鐘。
4. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或
1.LB 培養基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 15 h。


EPI400 感受態細胞注意事項：

2.  感受態細胞在冰上融化。
3. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。