EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞

EHA105 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼：                       保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

                

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞基因型：
C58 (rif ^R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strep^R) Succinamopine

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞簡要說明：
 EHA105菌株由EHA105菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ，此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti質(zhì)粒含有篩選標簽：strep，賦予EHA105菌株鏈霉素抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達10⁴cfu/μg。

EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞操作說明：

1.  取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.  每100μl感受態(tài)加1ug（體積不大于10ul）質(zhì)粒DNA，用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3.  加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當(dāng)平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h）。

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