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實驗分享 | 競爭法ELISA實驗操作指南

時間:2024/3/4閱讀:1240
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  實驗分享 | 競爭法ELISA實驗操作指南


  一、標準品稀釋及樣品準備

  樣本4℃,1000Xg 5min

  標準品4℃,10000Xg 1min

  1mL稀釋液溶解標準品,靜置1-2min,每管加入500μL標準品&樣品稀釋液,靜置后標準品混勻,將液體離心至底部(800Xg 1min)

  取同體積標準品原液稀釋,渦旋混勻,依次倍比稀釋標準品,最后一管為空白


標準品稀釋步驟.png


  二、生物素化抗體工作液制備

  取5940μL生物素化抗體稀釋液,加入60μL濃縮液,稀釋100倍后,備用

  顛倒混勻20次,備用

  三、標準品及樣本、檢測抗體點樣

  由低到高濃度,懸空加入,每孔加入50μL,處理后的樣品上清溶液,懸空,每孔50μL,生物素化抗體工作液,懸空加入,每孔50μL,腹膜后,標記簡稱。

  提前預熱,注意溫度:37℃孵育45min,1*洗液配制,取288mL雙蒸水,取25*濃縮洗滌液12mL,加入燒杯,磁力攪拌器混勻5-10min。

  四、HRP酶結(jié)合物工作液制備

  取11880μLHRP酶結(jié)合物稀釋液,加入120μL濃縮液,稀釋100倍后,備用。

  顛倒混勻20次,備用。

  平衡取出酶標板,勿觸摸板條底部。輕撕覆膜,避免液體濺出。參數(shù)設定(洗滌次數(shù)3次、洗板條數(shù)12條、洗滌液量350μL/孔、震板5s)

  拍干液體,更換吸水紙

  懸空垂直加入HRP酶結(jié)合物工作液,每孔100μL,腹膜后,標記。37℃孵育30min,平衡取出酶標板,勿觸摸板條底部,洗滌(參數(shù)設定:洗滌次數(shù)5次、洗板條數(shù)12條、洗滌液量350μL/孔、震板5s)

  拍干液體,更換吸水紙

  五、顯色

  懸空垂直加入底物溶液,每孔90μL,腹膜后,標記,37℃孵育15-30min,平衡取出酶標板,切勿觸摸板條底部,顯色后四孔出現(xiàn)明顯藍色梯度。

  六、終止反應

  懸空垂直加入終止液,每孔50μL,加入終止液時可看到藍色立轉(zhuǎn)為黃色。

  七、數(shù)據(jù)處理

  輕輕擦拭板底,放入酶標儀中,上機操作。

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