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怎樣用酶標儀檢測氟喹諾酮
一、概要：
氟喹諾酮類（FQNS）又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類，是一類十分重要的廣譜抗生素藥物，能抑制細菌DNA螺旋酶。其常在牛、豬和雞等家禽養殖中被作為獸藥使用。特別是雞、豬和魚/蝦等的養殖企業均使用其來防治家禽傳染病已成為獸醫臨診和水產養殖中重要的抗感染藥物之一，由于其耐藥性和潛在的致癌性引起廣泛的關注。歐盟理事會條例中對部分氟喹諾酮類藥物的大*值MRL作出了明確的規定。
二、試驗原理
采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被氟喹諾酮類抗原，樣品中殘留的氟喹諾酮類藥物和微孔條上預包被的抗原競爭抗氟喹諾酮類抗體，加入酶標二抗后，經TMB底物顯色，樣品的吸光值與其殘留物氟喹諾酮類藥物的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中殘留物氟喹諾酮類藥物的含量。
三、使用范圍：
可定性、定量檢測肌肉、肝臟、牛奶、奶粉等樣品中氟喹諾酮類藥物的殘留量。
四、使用設備及試劑
……酶標儀 450nm/630nm
……離心機
……均質器
……氮吹儀或旋轉蒸發器
……洗耳球
……聚苯乙烯離心管：10mL、50mL
……微量移液器20μL～200μL，100μL～1000μL
……刻度移液管
……天平：感量0.01g
試劑：
……甲醇 （分析純）
……二氯甲烷 （分析純）
……正己烷（分析純）
……濃鹽酸
……十二水磷酸氫二鈉（分析純）
……二水磷酸二氫鈉（分析純）
五、檢測步驟：
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）回溫30min以上，注意每種液體試劑使用前均需輕輕搖勻。
2、取出所需數量的微孔板，將不用的微孔放入帶有干燥劑的錫箔袋中，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5、加標準品/樣品：加標準品/樣品50ul/孔到對應的微孔中，然后加入抗試劑50ul/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250ul/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10～20s，用吸水紙拍干（拍干后若有氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標物：加入酶標物100ul/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15min，取出重復洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50ul/孔，再加底物液B液50ul/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應10～15min。（如顏色較淺可適當延長此步的反應時間）
9、測定：加入終止液50ul/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。