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P19479-pLVX-CMV-MCS-IRES-RFP-PGK-Puro質(zhì)粒
  • P19479-pLVX-CMV-MCS-IRES-RFP-PGK-Puro質(zhì)粒
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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pLVX-CMV-MCS-IRES-RFP-PGK-Puro質(zhì)粒
啟動子CMV
復(fù)制子pUC
克隆菌株Stbl3
培養(yǎng)條件37度
質(zhì)粒宿主哺乳細(xì)胞,慢病毒
質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)
片段類型ORF
片段物種空載體
原核抗性Amp
真核抗性Puro
熒光標(biāo)記紅色

注意事項(xiàng):轉(zhuǎn)化前請準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質(zhì)粒,室溫放置1min

2、從-80冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài),置于冰盒上解凍,并做好標(biāo)記;

3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中,冰浴30min

442熱激90s,再冰浴2min

5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩培養(yǎng)45min

66000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應(yīng)抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置培養(yǎng)12h~16h

9、挑取單克隆菌落至對應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)12h~16h,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒

 

psh-EGFP-Puro-CPEB4基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-TP53-shRNA2(human)基因沉默質(zhì)粒
pGEX-2TK蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pAC5.1b-Myc蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pBI121-MCS-mRFP1蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pAC5.1b-Myc-UB-K48蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pAC5.1b-Myc-UB-K63蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-EDAR-shRNA2(human)基因沉默質(zhì)粒

 

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