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上海禾午生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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P24037-pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro質(zhì)粒
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pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro質(zhì)粒
啟動(dòng)子EF1a
復(fù)制子pUC
克隆菌株Stbl3
培養(yǎng)條件37度
載體宿主哺乳細(xì)胞,慢病毒
載體用途蛋白表達(dá)
基因種屬空載體
基因類型ORF
原核抗性Amp
真核抗性Puro

一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付

 

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體;報(bào)告基因載體等;
2、基因定點(diǎn)突變,包括單點(diǎn)突變,多點(diǎn)突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建;
5、過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建。

 

pLVshRNA-U6-METTL14(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-IQGAP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-ARID3A(human)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-CMV-PD-1(mouse)-PGK-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒
pDNR-LIB-Hspa2(mouse)基因模板質(zhì)粒
pLVshRNA-U6-IQGAP1(mouse)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-EGFP-Puro-CAV1(human)-shRNA1基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-EGFP-Puro-CLTA(human)-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

 

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