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原代肺泡上皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)
PriCells：
原代肺泡上皮細(xì)胞（Primary Alveolar Epithelial Cells）的體外分離培養(yǎng)
1、*無(wú)血液殘留肺臟組織：
2、消化肺組織：
常用細(xì)胞消化酶：胰蛋白酶、彈性蛋白酶、膠原酶。
經(jīng)支氣管將酶灌注到完整的肺中消化，或把肺組織剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。
3、分離純化細(xì)胞：
原代肺泡上皮細(xì)胞的分離純化主要方法：
（1）密度梯度離心法：
密度梯度離心分離細(xì)胞的原理是不同細(xì)胞的沉降系數(shù)不同，在密度梯度離心中細(xì)胞所處的位置也相應(yīng)不同。 用ficoll或percoll不連續(xù)梯度離心法分離肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞。
（2）濾膜分離法：
肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞約10mm，比巨噬細(xì)胞(約25mm)和Ⅰ型細(xì)胞 (50mm-100mm)小，用150mm孔徑的濾膜初濾除去大的組織碎片，30mm-40mm孔徑的濾膜除去全部Ⅱ型細(xì)胞和部分巨噬細(xì)胞，采用 15mm的濾膜精濾。用濾膜分離操作簡(jiǎn)單，它和其他分離方法聯(lián)合使用可以提高純度。
（3）流式細(xì)胞技術(shù)法：
根據(jù)不同細(xì)胞之間的熒光差異，用熒光物質(zhì)標(biāo)記篩選。肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)含有豐富的脂類物質(zhì)，用親脂性熒光素標(biāo)記，可以得到純度很高的細(xì)胞。流式技術(shù)分離細(xì)胞的產(chǎn)量很低，但純度*。這種技術(shù)經(jīng)過(guò)完善在將來(lái)會(huì)更有吸引力。
（4）免疫黏附法：
用IgG包被培養(yǎng)板，把肺泡上皮細(xì)胞懸液置于板上，巨噬細(xì)胞和其他大多數(shù)非肺泡上皮細(xì)胞因?yàn)楹蠪c片段的受體而與IgG結(jié)合，吸附到板上，不黏附的肺泡上皮細(xì)胞被沖洗下來(lái)，簡(jiǎn)便易行，可除去絕大多數(shù)的巨噬細(xì)胞，有效的提高肺泡上皮細(xì)胞純度。
（5）貼壁選擇法：
貼壁選擇原理：肺泡上皮細(xì)胞完成貼壁的時(shí)間不同，這種特性用肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)做篩選。
總之，根據(jù)肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)最終目的，綜合幾種方法能達(dá)到預(yù)期效果。
例如：（1）先用濾膜過(guò)濾；（2）再用IgG包被法。
4、PriCells的產(chǎn)品
（1） 原代肺泡上皮細(xì)胞， 5×105 細(xì)胞數(shù)/1ml
（2） 原代細(xì)胞分離試劑盒
（3） 原代細(xì)胞分離鑒定盒
（4） 原代上皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
（5） 原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑