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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常大鼠主動脈內皮細胞的培養

時間:2021-10-9 閱讀:162
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PriCells: 正常大鼠主動脈內皮細胞的培養
 
實驗材料:
1. 大鼠主動脈血管;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
3. 培養用液:M199培養液或RPMI1640培養液(含20%小牛血清,pH7.2);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:1,V:V)混合消化液;D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;1%明膠溶液;
4. 培養器具:培養瓶或皿、白內障、眼科剪、鑷子等;
 
培養方法:
1. 將大鼠頸椎脫臼或頸動脈放血處死后,將整個大鼠泡于75%乙醇中消毒1min。在無菌狀態下,逐層剪開胸腔,分離取出主動脈,放含無菌D-Hanks液培養皿中;
2. 用眼科剪、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織。然后,用含抗生素的D-Hanks液沖洗血管的外表面及血管腔內的凝血數次,再放入另一無菌培養皿中;
3. 用眼科剪縱向剪開血管,平展在培養皿中。用非常銳利的手術刀將其切成1.5mm×1.5mm大小的動脈植塊,然后種植到培養瓶或培養皿中(培養瓶或皿用1%明膠預置4℃下過夜,使用前2h移入37℃,5%CO2培養箱中。用時可以先經含20%小牛血清的M199或RPMI1640培養液沖洗)。將動脈植塊的內膜面與瓶底(或皿底)接觸,種植密度約為1塊/cm2;
4. 置37℃,5%CO2培養箱中(濕度100%)靜置2h(干貼壁)。培養瓶皿若不用明膠包被則為0.5—1h。然后,加入少許含20%小牛血清的M199培養液或RPMI1640培養液(pH7.2),液量以略蓋過動脈植塊內膜面,而又不使植塊漂浮為宜;
5. 72h后,當細胞達一定密度時,將動脈植塊除去。換培養液1次。以后每2d換液1次,每次換1/2—2/3的液量。繼續培養8—10d,細胞融合成單層,即可傳代;
 
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 各種原代細胞DNA;
6. 各種原代細胞RNA;
7. 各種原代細胞蛋白質;


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