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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常骨內成骨細胞原代培養

時間:2021-10-13 閱讀:181
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PriCells: 正常骨內成骨細胞原代培養
 
實驗材料:
1. 骨組織來源:新生或胚胎大鼠、兔、人類胚胎或手術切除之骨組織;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 消化液:0.25%胰蛋白酶溶液,1mg/mlⅡ型膠原酶溶液;
4. 培養液:RPMI 1640培養基,配制培養液時加入15%的小牛血清,并用5.6% NaHCO3調節至pH 7.2;
 
實驗方法:
1. 取生后1—2d大鼠若干只,拉頸處死后投入盛有75%乙醇的容器內消毒3—5min。取出置于消毒培養皿中;
2. 用手術剪剪開頭頂部皮膚,取顱蓋骨(扁骨),放入盛有緩沖液的培養皿中。去除骨膜及周圍結締組織,再用緩沖液洗2次;
3. 將洗好的顱蓋骨片置于含少量小牛血清的培養皿中剪碎成1mm×1mm大小的骨片植塊;
4. 將骨片植塊直接接種于25ml螺旋口培養瓶內。也可在接種前,先用1mg/mlⅡ型膠原酶溶液消化植塊15—20min,經緩沖液清洗2次以除去消化液,加少量小牛血清于培養皿內,再將侵于小牛血清中的骨片植塊接種于培養瓶內。為了便于細胞鑒定,可在接種時將消毒蓋玻片條置于植塊周圍;
5. 反轉培養瓶,使種植有植塊的一面朝上。加入3ml左右的培養液,蓋好螺旋蓋,但不擰得過緊,以利于與外界進行氣體交換。將培養瓶置于37℃、5%CO2、飽和濕度的CO2培養箱中培養;
6. 2h后,植塊黏附較為牢固,此時輕輕翻轉培養瓶,使組織塊浸沒于培養瓶中,繼續培養。間隔3d換液一次;
 
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 原代細胞總蛋白質抽提物;
6. 原代細胞總RNA;
7. 原代細胞總DNA;


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