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PriCells: 細(xì)胞內(nèi)糖類染色方法—過碘酸席夫反應(yīng)法

時(shí)間:2021-10-15 閱讀:750
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PriCells: 細(xì)胞內(nèi)糖類染色方法過碘酸席夫反應(yīng)法
基本原理:
過碘酸是一種強(qiáng)氧化劑,過碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基變?yōu)橐叶┗叶┗^而與Schiff試劑結(jié)合,Schiff試劑本為無色亞硫酸品紅復(fù)合物,但它與乙二醛基結(jié)合后形成紫紅色反應(yīng)物。顏色反應(yīng)的深淺取決于組織內(nèi)多糖(包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等)的乙二醇分子的多寡。
基本原理:
1. 席夫試劑的制備
(1) 稱取0.5g堿性品紅加入100ml沸水中,不斷攪拌下煮5min,使其充分溶解;
(2) 待溶液冷卻至50℃時(shí)過濾,加入濃度為1mol/L的HCl 10ml;
(3) 當(dāng)溶液冷卻至25℃時(shí)再加入0.5g偏重亞硫酸鈉,在室溫下放置24h,其顏色呈褐色或淡黃色;
(4) 再將0.5g活性炭加入呈色液中振搖1min后過濾,濾液為無色;
(5) 將濾液置于棕色瓶內(nèi)于4℃密封保存,一般可保存數(shù)月;
2. 卡諾固定液配制
將30ml氯仿和10ml苯y(tǒng)i酸加入60ml純乙醇中即得;
3. 甲醛鈣固定液配制
甲醛10ml和1g CaCl2混合加水定容至100ml即得;
染色步驟:
1. 用Hanks液將蓋玻片漂洗3次;
2. 用卡諾(Carnoy)固定液或甲醛鈣固定液固定5—10min;
3. 加入0.5%過碘酸作用10—15min;
4. 用蒸餾水漂洗1—2min;
5. 移入席夫試劑中作用15—30min,蓋片樣品稍稍變紅;
6. 用自來水漂洗5—10min,蓋片樣品變紅;
7. 用蒸餾水反復(fù)沖洗;
8. 用50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度乙醇逐級(jí)脫水各2min;
9. 用二甲苯透明,用光學(xué)樹脂封片后觀察;
結(jié)果:
細(xì)胞含糖區(qū)呈紫紅色。細(xì)胞核呈粉紅色至紫紅色,胞質(zhì)無色;



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