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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 原代細(xì)胞甲基綠-哌咯寧法顯示DNA和RNA

時間:2021-10-18 閱讀:323
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PriCells: 原代細(xì)胞甲基綠-哌咯寧法顯示DNA和RNA
基本原理:
甲基綠(methyl green)和哌咯寧(pyronin)均為堿性染料,因此可與帶負(fù)電荷的磷酸根形成鹽。甲基綠分子有2個正電荷,易與雙鏈DNA分子結(jié)合使原代細(xì)胞核內(nèi)的DNA呈藍(lán)綠色。哌咯寧分子有一個正電荷,易與單鏈RNA分子結(jié)合使原代細(xì)胞質(zhì)和核仁內(nèi)的RNA顯示紅色。也有人認(rèn)為染色原理與核酸分子的空間構(gòu)型有關(guān)。
配制試劑:
1.       0.2mol/L pH4.8的乙酸緩沖液的配制
將1.2ml冰乙酸加蒸餾水定容至100ml,在使用時再加2.72g乙酸鈉(NaAc·3H2O),待*溶解后,即可使用;
2.       甲基綠-哌咯寧染色液配制
A液:取2g甲基綠加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可;
B液:取1g哌咯寧加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可;
用時將A、B液按5:2混合即可;
染色步驟:
1.       取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細(xì)胞,用Hanks液漂洗三次;
2.       70%乙醇溶液固定10min,取出后晾干;
3.       滴加甲基綠-哌咯寧染色液覆蓋蓋片樣品,染色15min;
4.       蒸餾水沖洗3次;
5.       95%乙醇分色,晾干;
6.       用二甲苯透明,用光學(xué)樹膠封片后觀察;
結(jié)果:
原代細(xì)胞核因含DNA呈綠色,細(xì)胞質(zhì)及核仁因含RNA呈紅色;




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